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在PCR擴增中，溶液中的模板變性后低溫退火時，引物與探針同時與模板結合。在引物的介導下，沿模板向前延伸至探針結合處，發(fā)生鏈的置換，Taq酶的5′-3′外切酶活性（此活性是雙鏈特異性的，游離的單鏈探針不受影響）將探針5′端連接的熒光基團從探針上切割下來，游離于反應體系中，從而脫離3′端熒光淬滅基團的屏蔽，接受光刺激發(fā)出熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。如測定病i人樣本中病原體的含量、實驗樣本中某一特定的mRNA的含量等。

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直接的方法指的是標記熒光的探針與擴增產物結合后即直接產生熒光，分子信標（molecular beacon）就屬于這一類，它本質上是一種標記熒光的發(fā)夾探針，當探針分子呈發(fā)夾結構時，結合在其兩端的熒光基團距離上接近，使得產生能量轉移效應，而不發(fā)生熒光。當互補序列出現(xiàn)時，探針與DNA雜交，探針轉變成一個開放的結構，呈線性，報告熒光基團與淬滅熒光基團彼此在空間上產生足夠的分離，熒光基團脫離了淬滅基團的影響，從而產生可被檢測到的熒光。PCR技術是目前最i簡單、快速的分子學檢測方法，但該方法的敏感性有限，因此以PCR為基礎的更新方法應運而生。

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熒光定量PCR樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯i仿，蓋緊管蓋。廣州勱博--屠宰場核酸提取純化一般情況下，高溫消毒時，60℃就可以將多數(shù)病原殺滅，但汽i油噴燈溫度達幾百度，噴燈火焰一掃而過，也不會殺滅病原，因時間太短。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

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近年來，分子遺傳學診斷技術發(fā)展迅速，熒光定量PCR（QF-PCR）技術、熒光原位雜交（FISH）技術、多重連接探針擴增（MLPA）技術、實時熒光PCR技術、染色體微陣列分析（CMA）技術、產前液相芯片（BoBs）技術、無創(chuàng)性產前基因檢測（NIPT）等已逐漸成熟，并開始向臨床轉化。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。分子遺傳學診斷技術多以遺傳物質DNA為檢測對象，不需要進行細胞培養(yǎng)，為傳統(tǒng)的細胞染色體核型分析技術提供了有效的補充。

廣州勱博儀器有限公司產品服務包括：非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。隨著生物芯片技術和熒光探針定量技術的結合，熒光定量PCR在醫(yī)學檢測及其他各個領域中的應用前景將更加廣闊，令人欣喜。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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非洲病毒的附著力到底有多強？直接接觸或者攜帶病毒的物品再次傳播的能力有多強？尚不清晰。目前已知非洲是高度接觸性傳播的急性、烈性i病毒，主要通過接觸或采食受非洲病毒污染的物品，以及通過昆蟲吸血而傳i染。相對定量分析以實時PCR方式執(zhí)行，在實時PCR分析過程中，PCR基因擴增一直在監(jiān)控中，在PCR進行期間進行數(shù)據(jù)采集，而不是在PCR結束時（終點PCR）才獲取數(shù)據(jù)。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。而且目前公認ASFV對外界的抵抗力強，在自然條件下可以長時間保持感i染性，可以在血液、糞便和各種組織中長期保持感i染性。含有病毒的血液是該病發(fā)生傳播的重要因素。

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非洲（African Swine Fever，ASF）是由非洲病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳i染病，致死率100%。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。自2018年8月寧省沈陽市發(fā)生第i一起非洲i疫情起，目前全國已有29個省115個地方發(fā)生非洲i疫情，已撲殺數(shù)百萬頭生豬，直接經(jīng)濟損失數(shù)百億元。目前全世界都沒有有效的非洲i疫i苗進行預防，現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對非洲病毒進行檢測，根據(jù)檢測結果，對發(fā)生疫情的地方嚴防死守，對疫點地區(qū)生豬全部撲殺，進行無害化處理，防止疫情的擴散。