低溫生物的濾紙保藏法

(1)將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘。

(2)將需要保存的，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長。

(3)取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

(4)用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

(5)將安瓿管放入內(nèi)有二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

(6)將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。

(7)需要使用，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破碎，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。

細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設(shè)備。

分離篩選低溫生物的基本程序

流程

4.1 優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

融化培養(yǎng)基→倒平板→打散孢子團(tuán)?！荻认♂尅坎计桨濉囵B(yǎng)觀察→滴加碘液→挑菌落→接種→培養(yǎng)→糖化酶活力測定→保存

4.2 酸乳制品中的乳酸菌的分離

制培養(yǎng)基→倒平板→梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)觀察→挑菌落→接牛乳管→培養(yǎng)觀察→傳代培養(yǎng)→挑選凝乳管→乳酸測定→保存

5 步驟

優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

（1）融化淀粉察氏培養(yǎng)基，稍冷后倒平板與斜面數(shù)個(gè)。

（2）取種曲少許，加入10mL帶玻璃球的無菌生理鹽水的三角瓶中，用力振蕩打散孢子團(tuán)粒，使之形成均勻的孢子懸浮粒。然后將其用無菌紗布過濾于無菌試管中。

（3）將上述濾液以10倍稀釋法知釋至10-7，取后3個(gè)稀釋度的稀釋液各0.2mL，于淀粉察氏培養(yǎng)基平板上用無菌涂布器分別依次涂布2至3個(gè)皿，30℃培養(yǎng)1~2d。

（5）性能測定：測定各菌落的糖化酶活力。

低溫生物菌種發(fā)酵

1)生物有機(jī)肥完全腐熟，蟲卵死率達(dá)到97%以上;農(nóng)家肥堆放簡單，蟲卵死率低。

2)生物有機(jī)肥無臭;農(nóng)家肥有惡臭。

3)生物有機(jī)肥施用方便，均勻;農(nóng)家肥施用不方便，肥料施用不均勻。

4 生物有機(jī)肥與生物菌肥的區(qū)別:

1)生物有機(jī)肥價(jià)格便宜，每噸在800元左右;生物菌肥價(jià)格昂貴，每噸上萬元。

2)生物有機(jī)肥含有功能菌和有機(jī)質(zhì)，能改良土壤促進(jìn)被土壤固定養(yǎng)分的釋放;生物菌肥只含有功能菌，通過功能菌來促進(jìn)土壤固定肥料的利用。

3)生物有機(jī)肥的有機(jī)質(zhì)本身就是功能菌生活的環(huán)境，施入土壤后容易存活;而生物菌肥的功能菌可能不適合有的土壤環(huán)境