蛋白結(jié)晶板發(fā)展

可明顯提高其結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量.隨著該方面成功案例的不斷積累,分子改造技術(shù)越來(lái)越凸顯出其在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析中的重要作用,特別是對(duì)一些難以結(jié)晶或提高晶體質(zhì)量的蛋白質(zhì)而言,其應(yīng)用價(jià)值更不可忽視.針對(duì)近年來(lái)分子改造技術(shù)在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的應(yīng)用進(jìn)行了回顧與總結(jié),并展望了其未來(lái)的發(fā)展。

在高密度微孔板技術(shù)和DNA微陣列技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的蛋白質(zhì)芯片技術(shù),能夠在蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行基因高通量表達(dá)分析,從而成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的有效方法.蛋白質(zhì)芯片依靠手工,壓印或噴墨的方法將探針蛋白點(diǎn)樣在化學(xué)膜,凝膠,微孔板或玻片上形成陣列,經(jīng)過(guò)與樣品的雜交捕獲靶蛋白。

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蛋白結(jié)晶板過(guò)程

概括了蛋白質(zhì)結(jié)晶的基本過(guò)程,闡述了蛋白質(zhì)結(jié)晶的早期發(fā)展歷程,重點(diǎn)介紹了蛋白質(zhì)結(jié)晶的近期研究狀況,主要包括:形核機(jī)理的研究,結(jié)晶條件的篩選和結(jié)晶技術(shù)的優(yōu)化以及基于結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)技術(shù).特別是對(duì)離子液體在蛋白質(zhì)結(jié)晶過(guò)程中的應(yīng)用及發(fā)展前景進(jìn)行了討論，

論述了國(guó)內(nèi)外生物大分子(蛋白質(zhì),酶等)沉淀結(jié)晶的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展,著重從結(jié)晶熱力學(xué),粒子聚集,結(jié)晶的成核與晶體生長(zhǎng),以及場(chǎng)的作用等方面闡述了蛋白質(zhì)沉淀結(jié)晶過(guò)程的特定現(xiàn)象與可能的結(jié)晶機(jī)理,對(duì)蛋白質(zhì)的沉淀結(jié)晶過(guò)程作了的描述,并提出未來(lái)研究方向,為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析,新藥設(shè)計(jì),生化研究以及工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的基礎(chǔ)。

蛋白結(jié)晶板

形核劑的添加使蛋白質(zhì)晶體異相形核,相較于均相形核其需要克服的阻力小,形核勢(shì)壘低.因而形核劑的使用對(duì)于難結(jié)晶蛋白或者起始濃度過(guò)低的蛋白質(zhì)結(jié)晶具有重要意義.隨著結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展,形核劑在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的研究仍是結(jié)晶方法學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題.多孔微球?qū)Φ鞍踪|(zhì)分子的吸附作用有利于無(wú)序蛋白質(zhì)分子團(tuán)簇的形成,進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)形核.添加多孔微球不但可以增加結(jié)晶條件篩選數(shù),也可以提高晶體質(zhì)量.促進(jìn)蛋白質(zhì)分子有序排列的形核劑籽晶的使用,使晶體的形核生長(zhǎng)過(guò)程始終處于結(jié)晶體系溶液濃度較低的狀態(tài),而交聯(lián)的籽晶因?yàn)榉€(wěn)定性更高而更有應(yīng)用前景.新型交互擴(kuò)散結(jié)晶板中。