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發(fā)布時(shí)間:2021-07-27 16:26  
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反相模式下,溶劑體系的極性應(yīng)以樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的次序遞減,并以遞增程度遞減。要確保所選擇的樣本溶劑不會洗脫目標(biāo)物,所選擇的淋洗劑應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下,很大限1度地洗脫干擾物,所選洗脫劑應(yīng)能碰巧完全洗脫目標(biāo)物。
正相位模式是 SPE小柱相的固定相極性大于流動(dòng)相極性的分離模式。主要用途:
固相萃取材料極性表面與物極性官能團(tuán)極性相互作用;極性力比非極性力強(qiáng),但比離子力弱;常用的極性基團(tuán)有羥基,胺基,巰基等。弱極化基質(zhì)環(huán)境有利于形成極性力,因?yàn)槿鯓O化溶劑不能與極性固定相形成氫鍵功能團(tuán)。結(jié)果表明: SPE正相萃取后,樣品基質(zhì)多為弱極性,如正己烷、二1氯甲1烷、菜油等,而目標(biāo)物多含有極性官能團(tuán)。
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渠道效應(yīng)
當(dāng) SPE小柱填料裝實(shí)后,流速過小柱時(shí),液體是以層流通過填料層,將填料層充分浸潤,潤濕的液面截層向上推進(jìn),見附圖;流速過大時(shí),柱床厚度過大,可能在填料內(nèi)形成溝道,液流將穿過溝道,快速通過小柱,而使填料浸潤不足,從而使得體與填料的接觸面積大大減少,嚴(yán)重影響填料對目標(biāo)物質(zhì)的保留性。
溶液環(huán)境的 pH如何影響化合物在柱狀物上的保持性,我們?yōu)槭裁匆P(guān)注該化合物的 pKa值,這些因素需要放在C18柱狀物上嗎?
A:首先, Ka指酸度系數(shù),也稱為酸離解常數(shù),可以被理解為酸離解H離子的能力,而 pKa=- lgKa,對于酸,在環(huán)境中 pH離子的平衡如下
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對正相體系,先對目標(biāo)化合物的正己烷溶液進(jìn)行上樣,然后用5%、10%、20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%和的正己烷溶液對目標(biāo)化合物進(jìn)行洗脫,分別收集洗脫液的分析結(jié)果,建立淋洗曲線,確定目標(biāo)化合物洗脫后的溶劑體系,淋洗后的甲1基叔丁基1醚含量應(yīng)略低于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系,而洗脫液中甲1基叔丁基1醚的含量應(yīng)略高于目標(biāo)化合物正好被洗脫時(shí)的溶劑體系。
合理處理 SPE柱,在 SPE柱中,吸附劑可能存在少量干擾物,有效活化可避免干擾物進(jìn)入洗脫液中,活化溶液應(yīng)選擇整個(gè)洗脫過程中洗脫強(qiáng)度zui高的溶劑體系。
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樣本制備問題
大部分流速問題是由于樣品制備不當(dāng)造成的。例如樣品混濁、離心過濾不充分造成上樣時(shí)篩板堵塞,或樣品本身的蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)處理不當(dāng),造成有效蛋白沉降,造成篩板堵塞。通過改進(jìn)前處理方法,可解決由這種原因引起的流速問題。因此,樣品準(zhǔn)備是保證 SPE正常流動(dòng)速度的di一步。
小柱子本身因素(填充尺寸和柱子體積)
充填粒徑的作用,大充填粒徑的充填越疏松,流動(dòng)相阻力越小,流速越快;小充填粒徑的作用,充填越緊,流速越慢。這一現(xiàn)象在弗羅里硅土和硅藻土小柱中都很明顯。小柱粒徑范圍一般為40-60 um,農(nóng)殘級弗羅里硅土的粒徑范圍為75-150 um,大柱粒徑范圍為600-900 um。因此弗羅里硅土和硅藻土小柱的流速會比一般小柱要快,特別是大孔硅藻土小柱,在使用時(shí)需要配以導(dǎo)流針來控制流速。
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特征:易濕潤,不易滲透,耐酸堿范圍寬(pH 1-14),在有機(jī)溶液中穩(wěn)定,酸性萃取柱。
申請:藥液中和代謝產(chǎn)物的檢測,食物和乳制品中殺蟲劑和獸藥殘留的檢測,化裝品有效成分分析。
固相萃取法(Solid-Phase Extraction,簡稱 SPE)是近年來發(fā)展起來的一種樣品預(yù)處理技術(shù),它由液固萃取法和柱液相色譜法相結(jié)合的方法發(fā)展而來,主要用于樣品的分離、提純和濃縮,與傳統(tǒng)的液液萃取法相比,可提高分析物的回收率,更有效地將分析物與干擾組分分離,減少樣品預(yù)處理過程,操作簡便,節(jié)省時(shí)間和人力。它在,食品,環(huán)境,商檢和化工等方面有著廣泛的應(yīng)用。
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提取的堿性化合物:SC X是硅膠基質(zhì)的苯磺酸基填料,其磺酸基的負(fù)電性具有較強(qiáng)的陽離子交換能力,同時(shí)苯環(huán)具有疏水保留作用。SCX可從含正電荷的堿中提取,如胺。
經(jīng)典應(yīng)用:檢查殺蟲劑和在食品中的殘留量,例如大環(huán)內(nèi)酯類。
發(fā)現(xiàn)濫用。及其代謝產(chǎn)物的生物基質(zhì)分析。
洗脫和收集分析物(另一種情況是保留雜質(zhì)而分析物通過柱子)
在反相萃取柱上,清潔溶劑為含有農(nóng)業(yè)生產(chǎn)系統(tǒng)適當(dāng)濃度的溶劑的水或緩沖液;
為確定清洗溶劑的濃度和體積,將試樣加到 SPE柱上,用5~10倍 SPE柱體積的溶劑進(jìn)行清洗,對流出液進(jìn)行連續(xù)分析,得到清洗溶劑對分析物的洗脫曲線。按順序增大清洗溶劑強(qiáng)度,根據(jù)分析物在不同強(qiáng)度下的洗脫曲線,確定合適的清洗溶劑強(qiáng)度和體積;
洗脫和收集目的:將分析物全部洗脫并以小體積級分方式收集分析物,同時(shí)在 SPE柱上盡可能保留比分離物保留力更強(qiáng)的雜質(zhì);
收集的分析物級分可被氮?dú)獯蹈?,然后溶解在小體積溶劑中,以提高分析物的濃度,或調(diào)整溶劑性質(zhì)以作后期分析。