蛋白質(zhì)結(jié)晶方法

液-液擴(kuò)散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中，蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個(gè)有小孔的毛細(xì)管中，一個(gè)測(cè)熔點(diǎn)用的毛細(xì)管一般即可（如圖1.2）。下層是密度大的溶液，例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑，它會(huì)在上層。以1：1混合，沉淀劑的濃度應(yīng)該是所期終濃度的二倍。兩種溶液（各自約5μl）通過(guò)針頭導(dǎo)入毛細(xì)管，先導(dǎo)入下層的。通過(guò)一個(gè)簡(jiǎn)易的搖擺式離心機(jī)去除氣泡。再加入上層，進(jìn)而兩層之間形成一個(gè)明顯的界面，它們會(huì)逐漸彼此擴(kuò)散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno（1994）已經(jīng)發(fā)展液-液擴(kuò)散技術(shù)至法。蛋白質(zhì)溶液通過(guò)毛細(xì)力被吸入狹窄的管中，管的一端是封閉的。接著，開(kāi)放端入置于小容器的凝膠中，凝膠使得管豎直，蛋白質(zhì)溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上，整個(gè)裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過(guò)凝膠和毛細(xì)管的擴(kuò)散時(shí)間可以由毛細(xì)管插入凝膠的深度控制，從而蛋白質(zhì)溶液中即可形成過(guò)飽和區(qū)域，毛細(xì)管底部高而頂部低。這也可作為一個(gè)篩選佳結(jié)晶條件的額外信息。

蛋白結(jié)晶板使用

用于人工和高通量蛋白晶體生長(zhǎng)以及其他生物或有機(jī)晶體生長(zhǎng)的設(shè)備和方法.一微孔板包含多個(gè)單元格,以及一限定微孔板中單元格的邊框.在每個(gè)單元格中至少存在一個(gè)上部開(kāi)口的孔.單元格中的每個(gè)孔底部可以封閉,或者其底部是開(kāi)口的,但孔底部由一獨(dú)立部件封閉,其可以為獨(dú)立的膜或板(例如塑料,玻璃或金屬)或一模制部件。

獲得晶體及提高晶體質(zhì)量是蛋白質(zhì)結(jié)晶方法學(xué)中的兩大基本問(wèn)題.為解決這兩個(gè)問(wèn)題,結(jié)構(gòu)生物學(xué)家已發(fā)展了許多方法,其中針對(duì)蛋白質(zhì)本身進(jìn)行分子改造是非常重要的方法之一.通過(guò)蛋白質(zhì)工程技術(shù),如突變,還原化修飾,剪切或刪除構(gòu)象柔性環(huán)區(qū),融合蛋白,復(fù)合物共結(jié)晶,原位蛋白質(zhì)水解等方法對(duì)蛋白質(zhì)本身進(jìn)行分子改造。

蛋白結(jié)晶板

蛋白質(zhì)分子的三維結(jié)構(gòu)是生命科學(xué)研究中極為重要的信息,X射線單晶衍射技術(shù)是目前獲得結(jié)構(gòu)信息的手段,但如何篩選到個(gè)蛋白晶體是該技術(shù)必需的步,也是制約結(jié)構(gòu)生物學(xué)發(fā)展的主要瓶頸問(wèn)題之一.現(xiàn)在一般通過(guò)規(guī)模篩選的方法從眾多的溶液中篩選出可結(jié)晶的條件,但是工作量較大,效率也不高.回顧了近年來(lái)在提高結(jié)晶篩選效率方向取得的成就。

蛋白質(zhì)晶體板

進(jìn)而進(jìn)行衍射得到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)信息.蛋白質(zhì)結(jié)晶需要經(jīng)歷從未飽和區(qū)經(jīng)亞穩(wěn)區(qū)至形核區(qū)的形核過(guò)程以及從形核區(qū)到亞穩(wěn)區(qū)的生長(zhǎng)成熟過(guò)程.在整個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)晶過(guò)程中,形核過(guò)程是至關(guān)重要的一步，形核勢(shì)壘低.因而形核劑的使用對(duì)于難結(jié)晶蛋白或者起始濃度過(guò)低的蛋白質(zhì)結(jié)晶具有重要意義.隨著結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展,形核劑在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的研究仍是結(jié)晶方法學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題。