熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一種分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期發(fā)展起來(lái)的一種非放6射性原位雜交技術(shù)。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感5染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究等許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用熒光標(biāo)記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸?？捎脽晒鈽?biāo)記的探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而對(duì)基因進(jìn)行染色體定位。

原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一種固相分子雜交的方法，bai它是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針，在原位檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標(biāo)記物可分為同位素標(biāo)記探針和非同位素標(biāo)記探針兩大類。常用的同位素標(biāo)記物有3H、35S、125I和32P，非同位素標(biāo)記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類按核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。

原位雜交術(shù)可在原位檢測(cè)細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)，有很高的敏感性和特異性，已成為細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

多種探針標(biāo)記檢測(cè)系統(tǒng)

基于地高3辛、生物素和熒光標(biāo)記分子的標(biāo)記和檢測(cè)系統(tǒng)是常見(jiàn)的原位雜交檢測(cè)方法。

熒光標(biāo)記檢測(cè)常為直接探針標(biāo)記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進(jìn)行核酸標(biāo)記。由于標(biāo)記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過(guò)程中的考驗(yàn)，以及熒光分子易于衰減，其檢測(cè)靈敏度受到一定的影響。但對(duì)熒光分子的直接檢測(cè)呈現(xiàn)的背景較低。

根據(jù)不同的雜交實(shí)驗(yàn)要求，應(yīng)選擇不同的核酸探針。在大多數(shù)情況下，可以選擇克0隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如，在檢測(cè)靶序列上的單個(gè)堿基改變時(shí)應(yīng)選用寡核苷酸探針，在檢測(cè)單鏈靶序列時(shí)應(yīng)選用與其互補(bǔ)的DNA單鏈探針（通過(guò)克0隆人M13噬菌體DNA獲得）或RNA探針，寡核苷酸探針也可。長(zhǎng)的雙鏈DNA探針特異性較強(qiáng)，適宜檢測(cè)復(fù)雜的靶核苷酸序列和病原體 ，但不適宜于組織原位雜交，因?yàn)樗灰淄高^(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi)或核內(nèi)。在這種情況下，寡核苷酸探針和短的PCR標(biāo)記探針（80～150bp）具有較大的優(yōu)越性。