干細(xì)bao培養(yǎng)誘導(dǎo)分化

     干細(xì)bao是一類具有自我更新、高度增殖和多項(xiàng)分化潛能的細(xì)胞，理論上具有無(wú)限分裂能力，在特定條件下，可分化成特定組織。通常改變抑制 ES 細(xì)胞不分化狀態(tài)的培養(yǎng)條件, ES 細(xì)胞就可以分化成多種細(xì)胞類型。ES 細(xì)胞具有的這種能力在體外增殖并保持未分化狀態(tài)及其多向分化潛能的生物學(xué)特性,使其廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域, 它的潛在醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值已成為世界范圍內(nèi)研究的熱點(diǎn)。同時(shí)結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物，雙重染色，可判斷增殖細(xì)胞的種類，增殖速度，對(duì)研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)有重要意義。目前，已報(bào)道的自ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化的細(xì)胞主要包括胰島細(xì)胞、造血細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟gu細(xì)胞和黑素細(xì)胞等。

流式細(xì)胞分選

流式細(xì)胞分選技術(shù)是利用流式細(xì)胞分選儀，以高能量激光照射高速流動(dòng)狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒,測(cè)量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度,從而對(duì)細(xì)胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測(cè)的--種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長(zhǎng)將發(fā)光顆粒亞群分開(kāi)并可實(shí)現(xiàn)單ke隆分選，能復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類、定量和分離,單次可同時(shí)對(duì)其中一種到四種特定細(xì)胞進(jìn)行超高速分選純化、高通量單分選或細(xì)胞芯片制備。分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等，可進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細(xì)胞之間的差異化研究。7%的瓊脂糖和2xDMEM培養(yǎng)基在無(wú)菌試管中相混以后，再向管中加入0。硬件中樣本細(xì)胞丟棄的比例低于5%，保證樣本中目標(biāo)細(xì)胞的高回收率。

大鼠gu髓間充質(zhì)gan細(xì)胞的分離

操作方法

(1 )取SD大鼠( 2周齡)，頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺(tái)內(nèi)，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺(tái)面的泡沫板上。

(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，無(wú)菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀分離出大鼠股骨和脛骨，剔除骨頭表面肌肉, PBS溶液沖洗兩遍。

(3 )從中間剪斷股骨和脛骨，用2ml無(wú)菌注she器吸取DMEM/F 12溶液沖出gu髓細(xì)胞多次，再用針頭吹打，吸管吸入離心管內(nèi)，1000r/min離心5min，棄上清，用PBS重懸細(xì)胞。

(4 )緩慢將細(xì)胞懸液加入預(yù)先裝有5mL淋巴細(xì)胞分離液的15mL離心管內(nèi)，保持細(xì)胞懸液在淋巴細(xì)胞分離液上層，注意不要攪動(dòng)液面,保持二者分層界面。

(5 ) 2000rpm離心15-25min，離心后溶液分4層，吸取中間骨sui基質(zhì)細(xì)胞層(白色渾濁狀)， PBS洗三次。

(6)用含15%胎牛xue清及青鏈mei素的DMEM/F 12以106/mL的細(xì)胞濃度接種于25cm2培養(yǎng)瓶中， 置37°C、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

( 7 ) 24小時(shí)后棄去培養(yǎng)液(看細(xì)胞貼壁情況)，PBS沖洗2-3次去除末貼壁細(xì)胞，加入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。以后每3d半量換液1次，-般10d細(xì)胞生長(zhǎng)融合。

(8 )經(jīng)0.25%胰酶消化，1 : 2傳代，其后一般3-5d傳代1次,選取生長(zhǎng)良好的第三代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。