制備色譜能當分析色譜用嗎？

目前，很多客戶的要求都傾向于買一臺液相能同時解決制備和分析的所有問題，那就相當OK。這樣的客戶大多是科研經(jīng)費緊張，好不容易批下來點錢，不想都花在后期純化和分析上，所以盡量二合一。

在我看來，分析液相和制備液相是通用的，只是精度的差別問題。比如，分析的液相一般流速在0.1～10mL/min，活塞的一個沖程大概是10μL，而普通的制備液相一般都是10～100mL的流速，因此活塞桿的尺寸也會變大，一個沖程差不多是100μL；流速的精度相對來說就差了很多。流速大了，管路也相應(yīng)的粗了不少，以降低高流速帶來的背景壓力；但這樣的儀器用于分析的話，柱后的擴散現(xiàn)象相當?shù)膮柡Γ词乖谏V柱上達到基線分離的兩個峰，由于柱后擴散的作用，到達檢測器的時候，差不多又會合到一起了；另外就是檢測器的差異，主要是檢測池的大小和狹縫的大小不同帶來的靈敏度的不同。制備儀器一般靈敏度是分析的1/20，以保證大量進樣后，不會超過量程太多而平頭，分不清到底分沒分開了。

倒是有個折中的辦法，就是買分析型的液相，然后接個半制備的色譜柱。半制備就是直徑一厘米的柱子，流速5mL以內(nèi)，因此這個分析液相能達到；進樣量大約是分析柱的10～20倍，檢測器可能會平頭，沒關(guān)系，換個波長，找個吸收較弱的波長當檢測波長就OK了，不是大量制備的話，我想基本可以滿足需要了。

備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？

對高的價值的制備柱來講，延長柱子壽命是很重要的。一般要注意保護柱子，一般來說，制備柱子一般需要保護柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

（1）如果您所分離的樣品中雜質(zhì)較多而您在上樣前沒有經(jīng)過過濾（0.45微米），一些顆粒性雜質(zhì)會積聚在柱頭造成柱壓升高。

（2）也有可能是因為您所使用的流動向中含有緩沖鹽的原因，結(jié)晶或發(fā)生化學變化而堵塞?？梢园阎記_一沖。

（3）流動相是否符合液相色譜的要求？是否過濾處理？

同一種填料的分析柱、制備柱按線形放大公式套，分離度會不會變化？

一般會有一定的變化，原因有以下幾點：

（1）制備柱的裝填是否均勻，如不均勻則可能產(chǎn)生渦流擴散使各個組分的經(jīng)過通道的直徑不同、阻力不一樣，停留時間不同，色譜峰可能變寬。

（2）如果樣品在流動相中溶解度小，在制備色譜上會有不同的峰展寬。

（3）如果樣品在分析柱上有展寬或拖尾的現(xiàn)象，放大到制備柱上后峰的展寬和拖尾經(jīng)常會非常嚴重，導致分離失敗。

工業(yè)制備色譜

蛋白質(zhì)是具有一定構(gòu)象(空間結(jié)構(gòu))的生物大分子:其一級結(jié)構(gòu)是形成肽鏈的氨基酸序列(數(shù)目、種類、順序)，是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ);在一級結(jié)構(gòu)水平上，部分肽鏈發(fā)生卷曲和折疊，形成其二級結(jié)構(gòu)，這種卷曲和折疊是靠肽鏈中的羰基與氨基之間的氫鍵維持的:在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，多肽鏈再盤繞和折疊，形成三維空間形態(tài)，即為蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu):而蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)是指同一蛋白質(zhì)中各條肽鏈之間的相互關(guān)系。