ELISA試劑盒的應(yīng)用技術(shù)

ELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性夾心檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，這些就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。

Elisa試劑盒操作步驟

1、固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。

2、包被或抗原的挑選：將或抗原吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。

3、 酶標(biāo)記作業(yè)濃度的挑選：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法'，在正式試驗(yàn)體系里準(zhǔn)確地滴定其作業(yè)濃度。

4、酶的底物及供氫體的挑選：對(duì)供氫體的挑選要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。

Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方案

現(xiàn)白板，陽性對(duì)照不顯色 

1  顯色液變質(zhì) 更換新的顯色液

2  洗滌液配制有誤 請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制

3  未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入 注意不要漏加

4  終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽

5  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法錯(cuò)誤/或標(biāo)準(zhǔn)品有問題 請(qǐng)按照說明書所示配置說明書，注意單位和稀釋倍數(shù)

6  不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑混用 建議使用同批次試劑盒。不能混用不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑。