低溫生物菌種的實驗器材

細菌、酵母菌，霉菌。肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，河沙，瘦黃土或紅土、鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無水氯化鈣。滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5×1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。

細菌一般在什么溫度下不能存活？

細菌一般在什么溫度下不能存活？高至100攝氏度以上，低至-20攝氏度以下。

細菌也對人類活動有很大的影響。一方面，細菌是許多疾病的病原體，砂眼等疾病都是由細菌所引發(fā)。

然而，人類也時常利用細菌，例如乳酪及酸奶和酒釀的制作、廢水的處理等，都與細菌有關(guān)。在生物科技領(lǐng)域中，細菌有也著廣泛的運用。

細菌早期是被荷蘭人列文虎克在一位從未刷過牙的老人牙垢上發(fā)現(xiàn)的，但那時的人們認為細菌是自然產(chǎn)生的。直到后來，巴斯德用鵝頸瓶實驗指出，細菌是由空氣中已有細菌產(chǎn)生的，而不是自行產(chǎn)生，并發(fā)明了“巴氏消毒法”，被后人譽為“微生物創(chuàng)始人。

低溫生物菌種知多少？

實驗室菌種的傳代保藏過程

1. 按菌種說明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時，保藏菌種為第2代，但工作用菌種則為第三代。

3. 將第2代菌種管冷凍保存，將工作用菌種于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時間后用作工作用菌種（W3）。

5. 將第三代菌種（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉(zhuǎn)種后的G2菌種經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于5時，可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用菌種。

以上方法中，菌種被分為兩類。傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應(yīng)用其它方法。

生物有機肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種安全性分析

雖然目前生物有機肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種大多采用植物根際促生菌， 但近年來很多研究發(fā)現(xiàn)，芽孢菌屬和類芽孢菌個別菌株能產(chǎn)生菌素。 即便在菌種安全分級目錄中列為一級免做理學(xué)試驗的菌種， 如枯草芽孢菌、 多類芽孢菌、 地衣芽孢菌等個別菌株也檢測到部分溶血素基因， 潛在危害不容忽視。 因此， 開展生物有機肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種生物安全風(fēng)險評價， 從源頭上把好菌種安全關(guān)是產(chǎn)品質(zhì)量安全的首要保障。通過調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 用于生物有機肥產(chǎn)品的部分生產(chǎn)菌種分類地位不明確， 甚至混亂， 難以從源頭上進行安全風(fēng)險的初步識別 。 以常見生產(chǎn)菌種枯草芽孢菌為例， 實際上是一個表型相似的群體， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎縮） 芽孢菌、莫哈韋（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個緣種。生產(chǎn)企業(yè)送檢的枯草芽孢菌生物有機肥產(chǎn)品， 經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)很多產(chǎn)品實際為解淀粉芽孢菌， 且許多菌株具有很強的溶血作用。通過對生產(chǎn)企業(yè)調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 部分生產(chǎn)企業(yè)選擇分離于動物腸道的解淀粉芽孢菌作為產(chǎn)品生產(chǎn)用菌株， 該類菌種生產(chǎn)發(fā)酵周期短、 活菌數(shù)量高、 生產(chǎn)成本低， 但產(chǎn)品的應(yīng)用功效不佳， 溶血風(fēng)險大 ， 建議慎用。而植物來源的解淀粉芽孢菌溶血風(fēng)險小， 產(chǎn)品應(yīng)用效果好， 推薦使用。