熒光分光光度計(jì)基本原理

由氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光．不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見(jiàn)分光光度法類(lèi)似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。

熒光分光光度計(jì)是紫外嗎

熒光分光光度計(jì)不是紫外，這是兩個(gè)不同的概念。

紫外分光光度計(jì)檢測(cè)物質(zhì)環(huán)境的要求較低。其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光區(qū)、400～850nm的可見(jiàn)光區(qū)。

熒光分光光度計(jì)檢測(cè)物質(zhì)要求環(huán)境高，微量檢測(cè)，結(jié)果較準(zhǔn)確，不但可以做一般的定量分析，而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化，從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí)，其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系，即IF=KC，利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析，對(duì)被測(cè)物質(zhì)要求高。相比較，熒光光度計(jì)較準(zhǔn)確。

熒光光譜

熒光分析法的特點(diǎn)是靈敏度高，對(duì)某些物質(zhì)的微量分析可以檢測(cè)到 克數(shù)量級(jí)，如污水中的銀含量用熒光分析法可以檢測(cè)到 克，可以檢測(cè)到 克。對(duì)一些亦可檢測(cè)到 克。熒光分析的靈敏度比分光光度法的靈敏度高2~3個(gè)數(shù)量級(jí)，這是由于熒光分析的熒光和入射光之間成直角，而不在一條直線上，所以是在黑背景下檢測(cè)熒光。而分光光度法的與入射光在一條直線上，所以它是在亮背景下檢測(cè)。因此熒光分析法比分光光譜法靈敏度高。分光光譜法的靈敏度一般只能檢測(cè)到 克，兩者相差三個(gè)數(shù)量級(jí)。當(dāng)然熒光分析法比起帶電子顯微鏡的電子探針?lè)`敏度又低一些，然而電子探針儀器價(jià)格昂貴，使用不方便。

熒光分析的第二個(gè)特點(diǎn)是選擇性強(qiáng)，特別是對(duì)有機(jī)化合物而言。因熒光光譜既包括激發(fā)光譜又包括發(fā)射光譜，凡是能發(fā)射熒光的物質(zhì)，必須首先吸收一定波長(zhǎng)的紫外線，而吸收了紫外線后不一定就發(fā)射熒光。能發(fā)射熒光的物質(zhì)，其熒光波長(zhǎng)也不盡相同。如果即使熒光光譜相同的話(huà)，而它的激光光譜也不一定相同。反之如果它們的激發(fā)光譜相同，則可用發(fā)射光譜把它們區(qū)分開(kāi)來(lái)，因此供選擇的余地是比較多的。所以熒光分析的選擇性很強(qiáng)。例如有兩種物質(zhì)，它們的熒光光譜很相似，不易把它們分開(kāi)。但它們的激光光譜不會(huì)相同，因此就可用掃描激光光譜把它們分開(kāi)。如果用分光光譜法就難以辦到這一點(diǎn)，因?yàn)榉止夤庾V只能得到待測(cè)物質(zhì)的特征吸收光譜。所以分光光譜法的選擇性就沒(méi)有熒光分析法強(qiáng)。