廣州碩譜生物科技有限公司氨丙基SPE柱規(guī)格

保留雜質(zhì)這種凈化模式多用于食品或農(nóng)殘的檢測(cè)，下面舉個(gè)例子：

食品中丙1烯酰胺的檢測(cè)，樣品經(jīng)提后，凈化；

SPE柱：月旭Welchrom? C18E 500 mg/6mL；

活化：5mL甲1醇，5mL水；

上樣：待凈化液，收集；

洗脫：2mL30%甲1醇分次潤洗燒瓶，再上樣，收集，抽干；

合并上樣液和洗脫液，并用30%甲1醇水定容至5mL，并過0.22 μm濾膜，上HPLC檢測(cè)。

當(dāng)我們使用硅膠鍵合填料型色譜柱時(shí)，基于色譜知識(shí)，了解到硅膠鍵合填料一般廠商推薦的 pH值范圍是2-8，那么對(duì)于使用硅膠鍵合填料的固相萃取小柱，是否有必要嚴(yán)格遵守這一規(guī)定？

我們需要了解廠家推薦的pH2-8耐受范圍，是為了保證色譜柱的正常使用壽命，硅膠鍵合相在耐受范圍之外使用時(shí)，會(huì)導(dǎo)致鍵合相與硅膠基質(zhì)發(fā)生斷裂，從而破壞色譜柱的效力和保持其特性，但我們知道， pH耐受范圍以外的溶劑對(duì)色譜柱的影響，主要是一個(gè)累積的過程，在這種溶劑的作用下，色譜柱的性能會(huì)發(fā)生變化，從而使色譜柱的性能發(fā)生變化，產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的變化，壽命縮短。C18一般被當(dāng)作zui沒有選擇性或通用型的吸附劑，因?yàn)榻^大多數(shù)有機(jī)分子或多或少含有非極性基團(tuán)，C18可以從水溶液中吸附這些有機(jī)化合物。SPE小柱和色譜柱之間的一個(gè)區(qū)別是， SPE是一次性消耗品，在耐受溶劑范圍之外，短時(shí)間的溶劑洗滌對(duì)小柱的保留特性幾乎沒有影響，而且不會(huì)造成保留的顯著差異，因此它使用的 pH值范圍較寬，一般可在 pH值范圍1-10之間使用，而不會(huì)造成結(jié)果的差異。

固相萃取(Solid Phase Extraction，簡稱 SPE)是20世紀(jì)70年代中期發(fā)展起來的樣品前處理技術(shù)，其用途廣泛，并日益受到人們的歡迎。對(duì)于以上反相色譜柱，我們?cè)谑褂眉熬S護(hù)的時(shí)候可以按照同樣的操作方式：1、在條件允許情況下，在使用前zui好對(duì)新色譜柱按照說明書方法進(jìn)行柱效測(cè)試。按吸附劑填料和吸附機(jī)理的不同，主要分為正相、反相、離子交換和混合固相萃取小柱，采用正相、反相固相萃取小柱，主要用于萃取分離極性和非極性化合物，但對(duì)某些帶電物質(zhì)(離子化合物)的萃取回收率較低，如C18填料的固相萃取小柱，當(dāng)目標(biāo)化合物為離子態(tài)時(shí)，C18對(duì)該化合物的影響較小。針對(duì)這個(gè)問題，月旭推出了離子交換固相萃取硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)小柱。

固相萃取操作中常見的問題

凈化效果不理想

凈化模式的改進(jìn)通常而言采用保留目標(biāo)化合物的模式比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好，如果正在分析的項(xiàng)目為某一種或某一類化合物分析，zui好是采用保留目標(biāo)化合物的凈化模式；舉一個(gè)簡單的例子，同樣是分析蔬菜中的多菌靈(一類堿性農(nóng)1藥)，使用陽離子交換柱可以專一性地保留這些農(nóng)1藥，使它們基本與干擾物完全分離，而使用正相吸附劑或石墨化炭黑進(jìn)行保留干擾物的操作僅能把主要的干擾物除去，仍有較多干擾物存留。正相模式下，溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強(qiáng)度也逐漸增大。

另外，如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時(shí)，應(yīng)挑選選擇性好的吸附劑；選擇性方面，離子交換＞正相＞反相。

那么面對(duì)反相、正相固相萃取，在實(shí)際應(yīng)用中我們?cè)撨x哪一個(gè)

鑒于大部分化合物都具有多種功能基團(tuán)，在實(shí)際操作中，主要根據(jù)目標(biāo)物和干擾物的性質(zhì)考慮采用何種萃取機(jī)理。例如：2-萘胺為弱堿性化合物(pKa=4.16)，在一定 pH條件下可呈陽離子化狀態(tài)，同時(shí)又具有疏水和親水基。對(duì)由非極性力吸附到反相SPE柱上的目標(biāo)物，可用弱極性溶劑洗脫，如氯1仿、環(huán)1己烷、乙1酸乙酯等。此時(shí)可根據(jù)樣品基質(zhì)選擇有利于目標(biāo)物與干擾物分離的萃取機(jī)理。在目標(biāo)物處于極性較弱的樣品基質(zhì)中時(shí)，可利用極性相互作用，選擇正相萃取方式；而在極性樣品環(huán)境下，則可采用反相萃取方式。采用陽離子交換機(jī)制，可將萃取過程中 pH調(diào)至低于目標(biāo)物 pKa的兩個(gè) pH單位，即 pH=2.16。影響保留機(jī)制選擇的主要因素總結(jié)如下：

保留機(jī)制di一影響因素：目標(biāo)物官能團(tuán)的性質(zhì)

保留機(jī)制第二影響因素：樣品基質(zhì)的性質(zhì)

網(wǎng)上關(guān)于柱子是否能反沖一直有爭議，那是什么樣的柱子能反沖，什么不能。反沖之后，則為正者，或逆者。具體地說，每一種類型的柱子不只是 ODS柱，其他如正柱，氨基柱，離子交換柱等zui好解釋清楚。

答：一般正反相的柱子應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱的柱子才不能反沖，不過目前這種柱子已經(jīng)比較少見了。反向沖刷是為了沖刷掉柱頭上的污物，反向沖刷后還是要正著使用，以免兩個(gè)柱頭被污染。我們一貫主張：前向使用，后向沖洗。