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發(fā)布時間:2020-12-10 07:06  
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TE緩沖液 Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液是弱堿性,對DNA的堿基有保護性,因此,DNA在TE中的穩(wěn)定性較好,不易被破壞完整性或產生開環(huán)及斷裂,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。
將調節(jié)pH值的酸溶液換成,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),TAE是使用廣泛的緩沖系統。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量,且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率也較快,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果。
蛋白制備及純化過程中緩沖液的選擇非常重要,合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結構穩(wěn)定。
當我們純化蛋白時,的就是要保持蛋白在純化過程中不能失活,或者是盡量降低純化過程對蛋白活性帶來的損失。這就意味著蛋白在整個純化過程中要始終保持可溶性和活性。
因此設計一個防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了,尤其會凸顯在實驗結果上。在設計緩沖buffer時應考慮以下幾個因素:pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個因素都要根據你的目的蛋白進行優(yōu)化,并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標準。
1mol/L HEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯)于足量的異中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹
或貯存于-20℃。