等溫核酸試劑盒

RPA不受場(chǎng)地的限制，不需要昂貴儀器，對(duì)溫度要求低，恒溫?cái)U(kuò)增，時(shí)間短，可以在資源匱乏地區(qū)實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的目的，目前已廣泛用于食品安全及動(dòng)物疫病檢測(cè)，但國(guó)內(nèi)就PRA技術(shù)在禽病病原檢測(cè)中的研究并不多。未來RPA技術(shù)可能在以下方面進(jìn)一步突破：①研發(fā)專門引物設(shè)計(jì)軟件，降低引物設(shè)計(jì)難度。②反應(yīng)溫度范圍拓寬，不局限于某一溫度，可在某溫度范圍內(nèi)完成擴(kuò)增反應(yīng)。③實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)，結(jié)果判定更簡(jiǎn)便直觀。④可擴(kuò)增長(zhǎng)片段核酸。⑤研發(fā)出低廉的酶制劑，降低成本。相信隨著技術(shù)不斷進(jìn)步，勢(shì)會(huì)引起一場(chǎng)核酸檢測(cè)的革命，取代PCR技術(shù)在分子檢測(cè)中的霸主地位，在禽病病原的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中發(fā)揮更大的作用。

RPA反應(yīng)的適宜溫度在37℃~42℃之間，無(wú)需變性，常溫下即可反應(yīng)，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測(cè)。RPA檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?/span>（尤其是DNA）模板擴(kuò)增到可檢出水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。無(wú)需復(fù)雜樣品處理，即可實(shí)地檢測(cè)；既可擴(kuò)增DNA也可擴(kuò)增RNA，省去額外的cDNA合成步驟；檢測(cè)方式多樣：終點(diǎn)檢測(cè)、對(duì)擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控或通過側(cè)流層析試紙條（LFD）讀取結(jié)果。

試劑盒包括兩類：①.TwistAmp凍干研發(fā)試劑盒（包括TwistAmp Basic試劑盒、TwistAmp exo 試劑盒和TwistAmp nfo 試劑盒共三種）；②. TwistAmp液態(tài)研發(fā)試劑盒（包括TwistAmp Liquid Basic 試劑盒和TwistAmp Liquid exo 試劑盒共兩種）

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PCR，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是對(duì)待檢測(cè)樣本中的核酸進(jìn)行擴(kuò)增的一種方法。熒光PCR法，又稱qPCR法（Quantitative Real-time PCR, qPCR），是生物分子熒光技術(shù)發(fā)展的產(chǎn)物，即指在核酸擴(kuò)增反應(yīng)的過程中，加入以熒光化學(xué)物質(zhì)，并以熒光強(qiáng)度來測(cè)定PCR循環(huán)后產(chǎn)物中核酸水平。

熒光PCR的概念于1992年被日本科學(xué)家提及，并在4年后由美國(guó)公司ABI實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。如今，ABI公司在熒光定量PCR儀制造界的地位仍不可撼動(dòng)，其三代產(chǎn)品ABI 7500 Real-time PCR system是使用很廣泛的熒光定量PCR儀。

國(guó)內(nèi)核酸試劑企業(yè)快速跟進(jìn)，以公開的病毒序列作為靶序列，開發(fā)針對(duì)這一病毒的試劑。截至發(fā)稿，動(dòng)脈網(wǎng)從公開找到98款已經(jīng)完成開發(fā)的熒光PCR法SARS-CoV-2病毒的核酸檢測(cè)試劑盒，當(dāng)然還有很多在研產(chǎn)品和未公布產(chǎn)品信息的試劑盒沒有被統(tǒng)計(jì)在內(nèi)。

根據(jù)規(guī)定，核酸檢測(cè)試劑在疫情期間可以免臨床試驗(yàn)先上市，后補(bǔ)充臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)，審批有效期為1年。核酸檢測(cè)試劑盒獲國(guó)家局審批上市后，即可進(jìn)入各地醫(yī)院和逐步開放的第三方醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所進(jìn)行核酸檢測(cè)，對(duì)疾病預(yù)防控制中心的人群篩查工作形成有力補(bǔ)充。