ELISA試劑盒——會出現(xiàn)的問題及解決辦法

吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應時間超過太久。

解決辦法：請控制反應時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

Elisa試劑盒原理及用途

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測肌肉組織、牛奶等樣品中的米松（Dexamethasone，DEX），試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、酶標記物、、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的米松藥品和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗米松藥類，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含米松藥品含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中米松藥品的殘留量。

Elisa試劑盒的注意事項

Elisa試劑盒是否滅活：加熱可滅清中補體系統(tǒng)，在較少數(shù)情況下（培養(yǎng)ES細胞，平滑肌細胞時）建議滅活，在培養(yǎng)其余細胞時不建議滅清。滅活非常容易產生沉淀，如必須滅活請按56℃，30 min，輕微搖晃原則操作，滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產生沉淀。

Elisa試劑盒培養(yǎng)基：無培養(yǎng)基在結果重復性、細胞體外分化方面有優(yōu)勢，但是，仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或細胞生長狀態(tài)不良時，常常會先使用有的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，待細胞生長旺盛后再換成培養(yǎng)液。

Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案

不正常的標準曲線

1  錯誤的方法重懸標準品  加入正確量的溶液重懸標準品，重懸充分

2  標準品稀釋錯誤  按照說明書要求稀釋標準品

3  標準品污染  使用一次性的滅菌吸頭， 標準品貯存于2-8 ℃

4  錯誤的倍比稀釋步驟  按照說明書倍比稀釋標準品

5  波長選擇錯誤 TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長。

6  標準品混用  不同批號試劑勿混用

7  試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高，標準品失活  盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫

8  ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測，否則會出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）