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發(fā)布時(shí)間:2021-08-13 09:22  

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常規(guī)除氣方法1.吹氦脫氣。使用氦氣在液體中溶解度低于空氣這一特性,在0.1 MPa壓力下,大約60 mL/min的流速通入流動(dòng)相儲(chǔ)液容器10~15 min,就能有效地將溶解的空氣從流動(dòng)相中排除,可有效排除80%的氧氣。利用一種的分布式噴射裝置,一體積中的氦氣可以從流動(dòng)相中幾乎全部體積中排除。這就是說,1 L氦氣可以通過1 L流動(dòng)相進(jìn)行排氣。這樣的脫氣方法是好的,但是我國(guó)氦氣價(jià)格比較高,很少有實(shí)驗(yàn)室采用這種方法。

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2.加熱回流法。該方法的脫氣效果較好。運(yùn)行時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑流失,混流相比例將發(fā)生變化。3.抽真空除氣。這種方法可以用真空泵,將溶解氣體降到0.05~0.07 MPa。但真空脫氣將改變混合溶劑的組成,從而影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,故多用于單溶劑體系的分析。4.超聲波除氣。超聲波清洗機(jī)內(nèi)用超聲波對(duì)欲脫氣進(jìn)行振蕩10~20分鐘。該方法的脫氣效果差。5.聯(lián)機(jī)通風(fēng)。現(xiàn)商品 HPLC儀表,可與線式脫氣機(jī)配套。聯(lián)機(jī)除氣簡(jiǎn)單,故障少,效果好。推薦購買儀器時(shí)一定要購買,有些公司為選購件,所以與儀器公司談配置時(shí)要和公司確認(rèn)。



泵下一步要沖洗的是泵。在一次分析之后,不要在幾分鐘內(nèi)停泵,尤其是在流動(dòng)相中含有難揮發(fā)的緩沖液(例如磷酸鹽)。若不能連續(xù)使用,則在流動(dòng)相蒸發(fā)時(shí),難揮發(fā)物會(huì)粘附在活塞密封墊面上,產(chǎn)生難揮發(fā)物沉淀。它是造成泵密封墊磨損和單向閥泄漏的主要原因之一。因此,不論使用時(shí)間長(zhǎng)短,在停泵之前都必須用無緩沖液流動(dòng)相沖洗泵在半個(gè)小時(shí)以上,如果流動(dòng)相中有難揮發(fā)的鹽類,那么建議沖洗時(shí)間要長(zhǎng)一些。

自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)化進(jìn)樣器還應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行清洗。目前設(shè)備多配備有自動(dòng)進(jìn)樣器的洗液瓶,通常只要注意及時(shí)更換,補(bǔ)充沖洗液。還應(yīng)按照自動(dòng)化進(jìn)樣器中所用的洗滌液的流動(dòng)處理,并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定,清洗儲(chǔ)液瓶或更換洗滌液。目前自動(dòng)取樣器的安裝、操作都很簡(jiǎn)單,如果時(shí)間允許(尤其是在夜間運(yùn)行),每次分析后設(shè)純?nèi)軇?、2針(如、),也是一種好的做法。4、色譜柱在使用過程中,對(duì)柱子的污染增大。一般表現(xiàn)是:基線運(yùn)行時(shí),在已記錄的色譜中基線噪聲增加,泵壓力也增大。處理這一問題有效的方法是在每一批樣品分析完畢或準(zhǔn)備卸下柱子時(shí),清洗柱子(例如,、和水)。采用梯度沖洗效果較好,具體比例取決于柱體的使用說明及性能。



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探測(cè)器如為正常使用,檢測(cè)器應(yīng)根據(jù)其性質(zhì)、按說明書規(guī)定進(jìn)行清洗。比如, UV/VIS檢測(cè)器或 FL檢測(cè)器,當(dāng)沖洗柱和系統(tǒng)時(shí),檢測(cè)器循環(huán)池中的污染物也被一起清洗。但蒸發(fā)光檢測(cè)器或質(zhì)譜儀需要根據(jù)說明書定期清洗。使用中會(huì)產(chǎn)生難以揮發(fā)的污染物沉積,如離子源的噴針、毛細(xì)管、錐孔、預(yù)四極等元件,因此需要定期清洗。并且聯(lián)接具有這些探測(cè)器的系統(tǒng)沖洗時(shí),好與這些探測(cè)器斷開,以減少對(duì)探測(cè)器的污染。

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概述總而言之,如果實(shí)驗(yàn)室日常使用的液相色譜儀能夠認(rèn)真做好這三件事——除氣、過濾、沖洗,您的儀器就能得到很好的預(yù)防性維護(hù),使用起來也會(huì)覺得順手。誠(chéng)然,在實(shí)際操作中遇到的問題并不那么簡(jiǎn)單,但是這三個(gè)好習(xí)慣是正確操作、使用 HPLC系統(tǒng)的基礎(chǔ)。

LC對(duì)大多數(shù)人來說都是很好上手的儀器,但就算是使用了幾年、有經(jīng)驗(yàn)的分析員也會(huì)習(xí)慣于一些錯(cuò)誤的操作(師傅教錯(cuò)了嗎?),常常造成某些儀器故障。便利、快速的分析過程固然重要,但為了多做樣品而忽略了一些必要的步驟,常常會(huì)得不償失,哪些操作不能做?哪一種是不可偷的?這些小故障的機(jī)率并沒有教過呢?在液體相中的四個(gè)關(guān)鍵因素是什么呢?


一些柱效值的測(cè)量與計(jì)算方法由于色譜峰是假設(shè)在運(yùn)動(dòng)相中、固定相中樣品濃度為正態(tài)分布而獲得的樣品譜帶分布,所以常將色譜峰型看作正態(tài)曲線來計(jì)算理論塔板數(shù)。所以柱效(以理論塔板數(shù)量 n為單位)的公式習(xí)慣上定義為:在式中 tR為色譜峰的保留時(shí)間;σ2表示測(cè)定色譜峰與時(shí)間的偏差; a是與峰高(從測(cè)峰寬的基線量起)有關(guān)的常數(shù),而ω b是用時(shí)間表示由色譜峰頂點(diǎn)與色譜峰的基線相交點(diǎn)的切線相交的距離。

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假設(shè)某一色譜峰為正態(tài)峰型,則每一種方法均能得到相同的結(jié)果。即便是獲得較為理想的峰型及溶質(zhì),由于柱內(nèi)有溝槽或空隙,也會(huì)產(chǎn)生非正態(tài)峰型。因此不同的計(jì)算方法所得到的 n值相差較大。對(duì)于正常模式的偏離,通常用“前延”或“后延”表示。對(duì)這些峰型,測(cè)峰高度越高,計(jì)算出的理論塔板數(shù)值越大(精度越低)。很多情況下,色譜分析人員需要能夠反映整個(gè)峰型(包括拖尾)的柱效值,同時(shí)為了保證定量的重復(fù)性,還需要有很好的色譜峰對(duì)稱。此時(shí)色譜峰不對(duì)稱的計(jì)算方法是合適的。僅為了監(jiān)測(cè)色譜柱從次使用到壽命結(jié)束過程中的柱效,那么上述任何一種都可以,應(yīng)選擇簡(jiǎn)單的方法。