細(xì)胞實(shí)驗(yàn)介紹——細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)：

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是體外模擬細(xì)胞遷移能力和修復(fù)能力快捷的檢測(cè)方法。在長(zhǎng)滿的細(xì)胞培養(yǎng)板或者培養(yǎng)皿中，沿著中線使用移液器槍頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線，去除中線的細(xì)胞，細(xì)胞在0h、12h、24h后，觀察細(xì)胞往中線遷移情況，判斷細(xì)胞遷移能力。

一般流程：細(xì)胞接種培養(yǎng)-劃痕-不同時(shí)間點(diǎn)拍照

細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)是體外模擬細(xì)胞遷移和侵襲能力的檢測(cè)方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中，將細(xì)胞接種于小室中，利用培養(yǎng)液成分的差異誘導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力的差異。

一般流程：transwell小室準(zhǔn)備-細(xì)胞接種-細(xì)胞培養(yǎng)-transwell小室染色-顯微鏡拍照

結(jié)果示例：

                                       圖 A 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)圖；B，C 細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)圖

大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)

方法：分離大鼠主動(dòng)脈,直接貼壁于培養(yǎng)皿中,熒光倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),免yi組化Ⅷ因子相關(guān)抗原染色鑒定細(xì)胞.結(jié)果:約24小時(shí)組織塊邊緣有游離的 新生細(xì)胞長(zhǎng)出,7天即融合成片.消化傳代后細(xì)胞呈短梭形或三角形,單層生長(zhǎng),鋪路石狀,Ⅷ因子表達(dá)陽(yáng)性,呈指數(shù)增殖.凍存后復(fù)蘇細(xì)胞活性均超過(guò)90%.結(jié) 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法,凍存細(xì)胞存活率高,為體外研究提供了穩(wěn)定的模型.

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染及解決方法

霉菌污染

正常情況下，培養(yǎng)基在 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無(wú)雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，顯微鏡下可見(jiàn)絲狀和團(tuán)塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時(shí)，雖然細(xì)胞仍在生長(zhǎng)，但它們的生命狀態(tài)會(huì)在長(zhǎng)時(shí)間后逐漸惡化。

解決方法：用硫酸銅溶液擦拭 CO2 培養(yǎng)箱，向托盤(pán)中加入飽和硫酸銅或消毒后加入飽和磷酸氫二鈉高鹽溶液，避免霉菌污染。

如果霉菌污染，暫時(shí)轉(zhuǎn)移所有細(xì)胞，并立即徹底使用 guo 氧擦拭培養(yǎng)箱，包括層板和內(nèi)壁。將 guo 氧放在培養(yǎng)箱中一小時(shí)，使蒸汽擴(kuò)散，待 guo 氧氣味消散后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中。值得注意的是，培養(yǎng)箱需要每?jī)蓚€(gè)月定期清洗一次，尤其是在梅雨季節(jié)。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精連續(xù)擦拭培養(yǎng)箱，用紫外線照射也是一種有效的方法。7、將6孔板放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)后吸出培養(yǎng)基換上新配置的培養(yǎng)基DMEM6ml 胎清600u1 三抗300u1。

為防止霉菌污染，需添加 3μg/ml 、抑制素、fang

線菌素 D 或青鏈。一旦被污染，就不可能恢復(fù)，即使使用上述，也沒(méi)有什么區(qū)別。對(duì)于支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)，選擇是丟棄污染的培養(yǎng)物，并用使用新鮮的無(wú)支原體的儲(chǔ)存液，徹底消毒環(huán)境。如果所有的細(xì)胞都被污染了，那可能是整個(gè)培養(yǎng)系統(tǒng)污染了。因此，必須對(duì)培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行檢查。如果只是個(gè)別污染，可能是操作問(wèn)題，有必要注意實(shí)驗(yàn)操作步驟的規(guī)范。3x106細(xì)胞懸浮于15mlMEF生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，接種到200ml培養(yǎng)瓶中。