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發(fā)布時間:2021-06-27 05:31  
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然后分別鋪篩選平板使細(xì)胞長成菌苔(lawn),再將兩種菌苔復(fù)印到同一個三重篩選平板上,原則上只有誘餌和靶蛋白發(fā)生了相互作用的二倍體細(xì)胞才能在此平板上生長。單倍體細(xì)胞或雖然是二倍體細(xì)胞但BD融合蛋白和AD融合蛋白不相互作用的都被淘汰。長出來的進(jìn)一步通過β-半乳糖苷酶活力進(jìn)行鑒定。這項改進(jìn)不僅簡化了實驗操作,而且也提高了雙雜交的篩選效率。武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士創(chuàng)辦。同其他的生物技術(shù)一樣,原位雜交技術(shù)在其發(fā)展與應(yīng)用的過程中會出現(xiàn)一些問題,但隨著原位雜交技術(shù)的不斷改進(jìn)與完善以及檢測手段的改進(jìn),原位雜交技術(shù)的優(yōu)越性越來越突出,其應(yīng)用也會更加廣泛。公司長期致力于建立并完善多項基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺?,F(xiàn)憑借自身技術(shù)特色,依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢,面向全國提供的生物技術(shù)服務(wù)。
內(nèi)源性酶滅活:如果探針的檢測是通過酶促法進(jìn)行的,則樣品內(nèi)相應(yīng)的內(nèi)源性酶必須被滅活。如內(nèi)源性的POD可通過含1% H2O2的甲醛溶液處理30min。
石蠟切片的FISH要點
(1)組織固定,采用PH7.2的10%甲醛固定24h是比較適合的,PH很重要。較厚的組織塊建議切開后再固定。這一點小編已經(jīng)反復(fù)提過很多次了。良好的固定是所有病理實驗的前提。
(2)對于石蠟切片來說,采用蛋白酶K作為消化液是更優(yōu)的選擇。消化條件20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min。胃蛋白酶是極易失活的,失活了就沒法充分消化,消化過度又會使細(xì)胞核變模糊。綜合來看,小編更推薦蛋白酶K。
(3)石蠟切片的雜交溫度一般都是37攝氏度。而雜交時間則需要摸索才能得到更佳時間。不過,一般的過夜孵育基本可以達(dá)到目的。
(4)FISH實驗中非特異性著色是個難以避免的問題,我們能做的就是盡量減少背景。具體可作為的地方:充分嚴(yán)格漂洗、全程避免干片、探針濃度不宜太高、雜交溫度要控制在37℃。