低溫生物對(duì)沙土有什么要求？

1 沙土管制備
將河沙用60目過(guò)篩，棄去大顆粒及雜質(zhì)，再用80目過(guò)篩，去掉細(xì)沙。用吸鐵石吸去鐵質(zhì)，放入容器中用10%鹽酸浸泡，如河沙中有機(jī)物較多可用20%鹽酸浸泡。24小時(shí)后倒去鹽酸，用水洗泡數(shù)次至中性，將沙子烘干或曬干。另取地面下40～60cm非耕作層貧瘠且粘性較小的土，研碎，100目過(guò)篩,水洗至中性，烘干。將處理后的沙、土按質(zhì)量比2∶1混合?；靹虻纳惩练盅b入安瓿管或小試管中，高度為1cm左右，塞好棉塞，121℃濕熱滅菌30min。隨機(jī)抽取滅菌后的砂土管若干支，無(wú)菌條件下取少許砂土至營(yíng)養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)24小時(shí)，檢查無(wú)微生物生長(zhǎng)后方可使用。
      2 斜面培養(yǎng)物的制備
      參照定期移植法。
      3 制備菌懸液
     向培養(yǎng)好的斜面培養(yǎng)物中注入3～5mL無(wú)菌水，洗下細(xì)胞或孢子制成菌懸液。用無(wú)菌吸管吸取菌懸液，均勻滴入沙土管中，每管0.2～0.5mL。霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。
      4 干燥
真空抽去沙土管中水分。
      5 保藏
      將沙土管用火焰熔封后存放于低溫(4～6℃)干燥處保藏，每隔半年檢查一次存活性及純度?；?qū)⑸惩凉苤苯佑门Ｆぜ埢蛩芰霞埌?，置干燥器?nèi)保存。
保藏時(shí)間2～10年。
     6 恢復(fù)培養(yǎng)
     無(wú)菌條件下打開(kāi)沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出菌落后再轉(zhuǎn)接一次?；蛉∩惩亮Ｓ谶m宜的液體培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面。

                                                          低溫生物的篩選

對(duì)水中氮的有機(jī)物去除起主要作用的是氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌，它們適宜溫度多為30～35℃，但是對(duì)于北方寒冷地區(qū)來(lái)說(shuō)，偏低的水溫明顯不利于普通氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌發(fā)揮其對(duì)氮素有機(jī)物的去除作用。因此，篩選適用于北方寒冷地區(qū)的低溫氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌對(duì)于北方地區(qū)的污水處理有著現(xiàn)實(shí)意義。本文提出了一種篩選低溫氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌的方法：在15～18℃進(jìn)行氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌的富集、的分離純化、初篩、作用效果的測(cè)定。通過(guò)此一系列步驟從培養(yǎng)基中分離出氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌和反硝化細(xì)菌各6株。

低溫生物的冷凍干燥保藏法

(1)準(zhǔn)備安瓿管用于冷凍干燥保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形狀可用長(zhǎng)頸球形底的，亦稱(chēng)淚滴型安瓿管(圖Ⅶ-15)，大小要求外徑6-7.5mm，長(zhǎng)105mm，球部直徑9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。也可用沒(méi)有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘，備用。

(2)準(zhǔn)備，用冷凍干燥法保藏的，其保藏期可達(dá)數(shù)年至十?dāng)?shù)年，為了在許多年后不出差錯(cuò)，故所用要特別注意其純度，即不能有雜菌污染，然后在適培養(yǎng)基中用適溫度培養(yǎng)，使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。細(xì)菌和酵母的菌齡要求超過(guò)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，若用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的進(jìn)行保藏，其存活率反而降低。一般，細(xì)菌要求24-48小時(shí)的培養(yǎng)物;酵母需培養(yǎng)3天;形成孢子的微生物則宜保存孢子;線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7-10天。

(3)制備菌懸液與分裝以細(xì)菌斜面為例，用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中，制成濃菌液，每支安瓿管分裝0.2ml。

(4)冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售，價(jià)值昂貴，此處介紹的是簡(jiǎn)易方法與裝置，可達(dá)到同樣的目的。

將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍，無(wú)低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精的液或干冰酮液，溫度可達(dá)-70℃。將安瓿管插入冷凍劑，只需冷凍4-5分鐘，即可使懸液結(jié)冰。