地衣芽孢桿菌對鹽堿地的改良

地衣芽孢桿菌對鹽堿地的改良 土壤內(nèi)鹽分積累的危害 土壤結(jié)構(gòu)黏滯，通氣性差，容重高，土溫上升，好氣性微生物活動差，養(yǎng)分釋放慢，滲透系數(shù)低，毛細(xì)作用強等，導(dǎo)致表層土壤鹽漬化進(jìn)一步加劇，造成土壤冷、 硬、板現(xiàn)象。一般說來，當(dāng)土壤表層或亞表層中的水溶性鹽類累積累超過 0.1％，或 土壤堿化層的堿化度超過 5％，就屬于鹽漬土。鹽堿地對植物的危害 a、引起植物的生理干旱。此外由于地衣芽孢桿菌無致病性，并可以分泌多種酶和，而且還具有良好的發(fā)酵基礎(chǔ)，所以用途十分廣泛。過多的可溶性鹽類，可提高土壤溶液的滲透壓，引起植物 的干旱。 b、危害植物組織。干旱季節(jié)，表土層鹽分過量積聚 易傷下胚軸。在高 pH 值下，還會導(dǎo)致 OH 一對植物的直接。植物組織內(nèi)鹽分過量積聚，會使原生質(zhì)受害，蛋 白質(zhì)合成受阻，含氮的中間代謝產(chǎn)物積累，造成細(xì)胞。 c、影響植物正常營養(yǎng)吸收。由于交換性 Na 的競爭，使植物對鉀、磷和其他營養(yǎng)元素的吸收減少，磷的轉(zhuǎn)移也會受到抑制，從而影響植物的營養(yǎng)狀況。 d、 影響植物的氣空開閉。在高濃度鹽類作用下， 氣孔保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)的淀粉形成受到阻礙， 使細(xì)胞不能關(guān)閉，植物容易干旱枯萎。選擇耐鹽的巨大芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌優(yōu)勢菌株，生產(chǎn)出生物有機肥，用于植物 生產(chǎn)，在投入成本相同的情況下，植物生長發(fā)育良好，產(chǎn)量增加，而且鹽堿地土壤 理化性狀得到改善，土壤微生物數(shù)量增多。此外由于地衣芽孢桿菌無致病性， 并可以分泌多種酶和， 而且還具有良好的發(fā)酵 基礎(chǔ)，所以用途十分廣泛。在、農(nóng)業(yè)、科研方面都有重要的應(yīng)用

地衣芽孢桿菌的基因敲除

地衣芽孢桿菌基因敲除的方法在我們過去的中有描述（Cai et al., 2016）。土傳病害發(fā)病后，比較難以防治，菌在土壤中越冬，很難被，來年繼續(xù)侵害作物，如此循環(huán)，病害越來越嚴(yán)重。在這里，以構(gòu)建cydB缺陷菌株為例。簡言之，以地衣芽孢桿菌WX‐02基因組DNA為模板，采用引物cydB‐KF1/R1和cydB‐KF2/R2擴增得到cydB基因的上游和下游同源臂，經(jīng)重疊擴展(SOE)‐PCR得到融合片段。融合片段入到限制酶位點XbaI/SacI酶切后的T2(2)‐Ori中。菌落PCR和DNA測序證實重組質(zhì)粒(T2‐cydB)構(gòu)建成功。

將重組質(zhì)粒T2‐cydB電轉(zhuǎn)化至WX‐02，通過菌落PCR和質(zhì)粒抽提證實轉(zhuǎn)化成功。陽性轉(zhuǎn)化子首先在含20mg/L卡那的LB培養(yǎng)基中， 45℃條件下培養(yǎng)促進(jìn)單交換發(fā)生，然后在無卡那培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)。那敏感菌落經(jīng)菌落PCR驗證，獲得雙交換轉(zhuǎn)化株。這個突變株經(jīng)DNA測序后證實，并命名為WXΔcydB。1、生防機制對植物病菌的作用機制和方式是多樣的,主要包括競爭作用、抗生作用、溶菌作用和促進(jìn)植物生長等幾個方面。其他的基因（ythA, ctaC, qoxA, cydC, narG, nasC, resD）的敲除采用相同的方法。