ELISA試劑盒的應(yīng)用技術(shù)

ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，這些就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。

ELISA試劑盒的成分

1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2 酶標(biāo)記: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

3 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5 標(biāo)記稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1

8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) (450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記和顯色劑)

ELISA試劑盒的操作方法——間接法

以下是北京中檢維康生物技術(shù)有限公司為您一起分享的內(nèi)容，北京中檢維康生物技術(shù)有限公司專業(yè)供應(yīng)ELISA試劑盒，歡迎新老客戶蒞臨。

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.然后用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。