DNA連接酶不需要模板，因?yàn)镈NA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來。用DNA連接酶連接具互補(bǔ)粘性末端的DNA1片段或是用T4DNA連接酶直接將平末端的DNA1片段連接起來。

DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補(bǔ)的DNA鏈。DNA聚合酶的結(jié)構(gòu)是三磷酸腺苷。

DNA 連接酶是生物體內(nèi)重要的酶，其所催化的反應(yīng)在DNA的copy和修復(fù)過程中起著重要的作用。DNA連接酶分為兩大類:一類是利用ATP 的能量催化兩個(gè)核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴ATP的DNA 連接酶，另一類是利用煙酰胺腺piao呤二核苷酸(NAD ) 的能量催化兩個(gè)核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴NAD* 的DNA 連接酶。

DNA連接酶（DNA Ligase）也稱DNA黏合酶，在分子生物學(xué)中扮演一個(gè)既特殊又關(guān)鍵的角色，那就是連接DNA鏈3‘-OH末端和，另一DNA鏈的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連成完整的鏈。連接酶的催化作用需要消耗ATP。

制備互補(bǔ)DNA，往往需要先分離從目的基因轉(zhuǎn)錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質(zhì)是細(xì)胞中的主要蛋白質(zhì)，則此基因的產(chǎn)物是總mRNA的主要組成部分 [2]  。就胰島B細(xì)胞而論，此細(xì)胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時(shí)可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異結(jié)合所表達(dá)的蛋白質(zhì)(抗原)，則可從沉淀的核糖體中分離出胰島素特異的mRNA，一般特異mRNA只是細(xì)胞總mRNA中的次要成分。在這種情況下，不得不以密度梯度離心，按分子量大小把總mRNA分開，然后把分離開的mRNA直接用于試管中表達(dá)蛋白質(zhì)(用家兔網(wǎng)織細(xì)胞的溶胞產(chǎn)物或小麥胚芽提取物作為翻譯系統(tǒng)的誘導(dǎo)物)再用沉淀或聚酰胺凝膠電泳從許多表達(dá)的蛋白中測定出目的蛋白，從而確定表達(dá)該蛋白的特異mRNA。