Synthecon INC公司于 1990 年創(chuàng)立，創(chuàng)立者為 NASA 細(xì)胞研究計(jì)劃中的發(fā)明人。得到 NASA 的專利和技術(shù)轉(zhuǎn)移，重新設(shè)計(jì)了專利的 Rotary Cell Culture System (RCCS) ，適用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、研發(fā)和其他臨床的研究上。傳統(tǒng)靜態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)是在培養(yǎng)瓶或皿中進(jìn)行的。無(wú)論是細(xì)胞或組織均生長(zhǎng)在二維平面空間并接觸玻璃或塑料表面。這樣的方式會(huì)影響細(xì)胞中基因的表達(dá)且無(wú)法持...

RCCS?的原理和優(yōu)勢(shì)

     相比動(dòng)態(tài)和靜態(tài)組織培養(yǎng)系統(tǒng)，RCCS的主要優(yōu)勢(shì)是其能提供理想的環(huán)境，從而允許細(xì)胞聚集、3維生長(zhǎng)和分化。這個(gè)優(yōu)勢(shì)使得我們的培養(yǎng)環(huán)境非常接近于體內(nèi)。

在大多數(shù)的動(dòng)態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)中細(xì)胞/組織會(huì)受損，這主要是其與推進(jìn)器接觸而致。那么它為何會(huì)與推進(jìn)器接觸呢？因?yàn)閼腋?，那懸浮是如何產(chǎn)生的？這歸因于以下2個(gè)力：

1.受到推進(jìn)器產(chǎn)生的力；

2.在培養(yǎng)的氧交換和懸浮過(guò)程中噴出的氣泡所產(chǎn)生的 剪切力。

     在靜態(tài)的平面培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中，2維的環(huán)境和塑料基質(zhì)會(huì)改變基因表達(dá)和阻止分化。 相比之下，在RCCS?中生長(zhǎng)的細(xì)胞/組織因隨機(jī)變化的重力矢量而懸浮，從而在培養(yǎng)液中成連續(xù)的自由落體狀態(tài)。一個(gè)較好的比喻是：細(xì)胞從無(wú)限高的充滿液體的管中落下。組織在培養(yǎng)液中會(huì)落下、翻滾和混合，受不到任何主宰生長(zhǎng)方向的單個(gè)重力矢量的影響；組織會(huì)向各個(gè)方向生長(zhǎng)。這就是RCCS?的機(jī)制。

     由于系統(tǒng)無(wú)推進(jìn)器、空氣升液器、氣泡或攪拌器，使破壞性應(yīng)力減到1小。因維持在一個(gè)理想的流體軌道中，故細(xì)胞能共同生長(zhǎng)、互相交流和形成3維的結(jié)構(gòu)。

此外，RCCS?是目前唯1的能使研究者進(jìn)行共同培養(yǎng)，而這種培養(yǎng)能提供本能的分化、高細(xì)胞增殖、低的細(xì)胞率和增加細(xì)胞產(chǎn)物的分泌。

美國(guó)Synthecon賽斯康RCCS-1H單轉(zhuǎn)頭微重力三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)

細(xì)胞傳代的一般方法？

       開(kāi)始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞(單層細(xì)胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血X清、慶大溶液（1 萬(wàn)單位）、7.5％NaHC03 溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS 洗液。

        用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1）、細(xì)胞吹打管（20 ml）(以上用具需經(jīng)121℃至

少15 分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱

        操作步驟：鏡檢細(xì)胞，挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無(wú)污染、無(wú)異常及可X疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi)，加入滅活小牛血X清10m1，慶大溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。消化細(xì)胞；先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞表面1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細(xì)胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝，然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞，置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2～4 天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定)；填寫(xiě)傳代記錄。