微生物計數(shù)

1.血細胞計數(shù)法

將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數(shù)板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數(shù)，并求出每個小格所含細菌的平均數(shù)，再以此為依據(jù)，估算總菌數(shù)。

①此法的缺點是不能區(qū)分死菌和活菌。

②對壓在小方格界線上的細菌，應(yīng)當(dāng)取平均值計數(shù)。

③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母jun種群數(shù)量的變化

2.稀釋涂布平板法

原理:每個活細菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。

①這一方法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目

②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個活多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養(yǎng)體等。

④此法若不培養(yǎng)成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計數(shù)，這樣又稱涂片計數(shù)法。染色可用臺盼藍，臺盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數(shù)死細胞和huo細胞。

微生物限度檢查

陰性對照

   為確認(rèn)試驗條件是否符合要求，應(yīng)進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如陰性對照有菌生長，應(yīng)進行偏差調(diào)查。

   培養(yǎng)基適用性檢查

   微生物計數(shù)用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按chu方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進行培養(yǎng)基適用性檢查。

   按表1規(guī)定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，置表1規(guī)定條件下培養(yǎng)。每一試驗菌株平行制備2管或2個平皿。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。

   被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。

（4）需用特殊方法制備供試液的供試品

  膜劑供試品 取供試品，剪碎，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，浸泡，振搖，制成1：10的供試液。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。

  腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品 取供試品，加入pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液（用于腸溶制劑）或pH7.6 無菌磷酸鹽緩沖液（用于結(jié)腸溶制劑），置45℃水浴中，振搖，使溶解，制成1：10的供試液。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。

  氣霧劑、噴霧劑供試品 取供試品，置-20℃或其他適宜溫度冷凍約1小時，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉(zhuǎn)動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。6、液體接種從固體培養(yǎng)基中將菌洗下，倒入液體培養(yǎng)基中，或者從液體培養(yǎng)物中，用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中，或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中，都可稱為液體接種。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。用無菌zhu射器從每一容器中吸出藥液于無菌容器中混合，然后取樣檢查。

  貼膏劑供試品 取供試品，去掉防粘層，將粘貼面朝上放置在無菌玻璃或塑料器皿上，在粘貼面上覆蓋一層適宜的無菌多孔材料（如無菌紗布），避免貼膏劑粘貼在一起。微生物保存基本原理是在挑選優(yōu)良純培養(yǎng)物并使其處于休眠狀態(tài)基礎(chǔ)上，人為地創(chuàng)造一個有利于休眠的環(huán)境，使其長期保存后仍能保持zhong原有的優(yōu)良特性。將處理后的貼膏劑放入盛有適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀釋液的容器中，振蕩至少30分鐘。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。