現(xiàn)有的細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠的應用中會碰到哪些問題？

1）Matrigel（基質(zhì)凝膠）很難處理, 只能在低溫條件下溶解, 而且，不同批次間的產(chǎn)品在性能上、品質(zhì)上會有不同，即使來自同一個廠家也不可避免;

2）相對來說，建立的微環(huán)境并不十分穩(wěn)定, 較佳培養(yǎng)時間一般不會超過5天，且售價并不便宜；

3）重組層粘連蛋白和纖連蛋白僅適用于某些類型的細胞, 非常不穩(wěn)定且昂貴;

4）聚鳥氨酸通常與層粘連蛋白結合使用, 主要限于神經(jīng)元細胞。

1、現(xiàn)有的PHENODRIVE應用案列顯示PHENODRIVE 不僅可以方便地涂布于不同的培養(yǎng)耗材上使用, 也可以直接混入培養(yǎng)液參與懸浮培養(yǎng);

2、研究人員不需要設計特別的研究方案, 就可以得到并進行近似于自然界環(huán)境下的研究;

3、目前,在傳統(tǒng)條件下培養(yǎng)的細胞的不同行為限制了新的體外篩選,而PHENODRIVE則可以幫助改善這一限制,因為它提供了一種更近似于生物體內(nèi)的生長環(huán)境;

4、PHENODRIVE可用于細胞基礎研究,可用于患者移植前細胞的選擇和培養(yǎng)的研究;

5、在細胞基礎或組織工程支架中, PHENODRIVE可與細胞懸液結合使用, 以改善細胞的輸送、移植和在許多臨床應用中的受控生長（如、骨缺陷）等應用中進行研究;

問：如何使用PHENODRIVE凍干粉末？

答：在乙醇或任何水介質(zhì)中溶解, 將基質(zhì)粉末稀釋至0.01mg/mL至0.1mg/mL的濃度，在pH值7.4 的無菌緩沖溶液中, 或在75% 乙醇（用于快速涂布）中并過濾。

問：如何使用PHENODRIVE對96孔板或24孔板進行涂布？

答：使用移液管將重組液注入各孔（96孔50微升, 24孔200微升）并在無菌條件下通過溶劑蒸發(fā)進行實現(xiàn)涂層（建議紫外線照射環(huán)境）。靜電紡絲并以其制造裝置簡單、紡絲成本低廉、可紡物質(zhì)種類繁多、工藝可控等優(yōu)點，已成為有效制備納米纖維材料的主要途徑之一。蒸發(fā)時間將根據(jù)基質(zhì)、濃度和/或體積而變化, 并在干燥后進行清洗。建議無接種細胞, 可在細胞粘附后（如播種后3小時左右）添加。

PHENODRIVE凍干粉末的使用方法：

       與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基質(zhì)膠相比, 我們的合成基質(zhì)膠使用過程極為簡單, 在室溫下即可實現(xiàn)重組使用, 這里就 PHENODRIVE的標準應用流程介紹如下:

       由于PHENODRIVE 是以無菌凍干粉末狀態(tài)進行存儲的, 因此在使用時需要對其進行重組。靜電紡纖維除直徑小之外，還具有孔徑小、孔隙率高、纖維均一性好等優(yōu)點，使其在氣體過濾、液體過濾及個體防護等領域表現(xiàn)出巨大的應用潛力。實驗人員可以根據(jù)需求,取適量的粉末將其溶解進水、乙醇或培養(yǎng)液中, 這個過程非常簡單, 待其溶解后得到無色、透明液體經(jīng)過濾后即可準備用于培養(yǎng) , 這一過程即重組。重組后的液體可在-20℃ 的低溫下保存3至少3個月。

       對于這類耗材表面的涂布應用, 通常建議將PHENODRIVE 凍干粉末溶解進75% 的乙醇中, 按要求的濃度進行重組, 將經(jīng)過濾的重組溶液澆鑄在需要涂布的器皿表面,并在無菌的環(huán)境下讓其自然蒸發(fā)（建議紫外線照射的無菌環(huán)境下）, 待溶劑蒸發(fā)盡后, 即在器皿表面留下一層透明的薄膜,即完成涂布的過程。在并排electrorspinning系統(tǒng)中有兩個注射泵在旋轉器滾筒兩側，所以有2個注射泵，2掃描系統(tǒng)，2和2的距離調(diào)節(jié)高壓電源。

建議：在無情況下種植細胞, 待細胞粘附后再添加, 比如在細胞種植3小小時后。

       如果采用乙醇溶液進行重組, 應確保所使用的聚合物支架不溶于乙醇 。按照粉末重組步驟, 然后用移液器移取足夠的重組溶液將支架完全覆蓋, 同樣采用自然蒸發(fā)的方法在支架的表面及空期間形成一層透明的薄膜。

       溶解待培養(yǎng)細胞類型的無組織培養(yǎng)基中的PHENODRIVE, 方法是按照粉末步驟配置適當濃度的重組透明重組溶液,再將從組后的溶液與細胞懸浮液混合, 以達到0.001% ~1%（V/V）的終 PHENODRIVE 濃度。2可以對產(chǎn)品的多種參數(shù)進行控制，如孔隙度、形態(tài)、纖維直徑以及特殊的受力能力等。細胞懸浮液的典型細胞濃度是40000個/ml ~1000000個/ml。