干細bao培養(yǎng)誘導分化

     干細bao是一類具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞，理論上具有無限分裂能力，在特定條件下，可分化成特定組織。通常改變抑制 ES 細胞不分化狀態(tài)的培養(yǎng)條件, ES 細胞就可以分化成多種細胞類型。ES 細胞具有的這種能力在體外增殖并保持未分化狀態(tài)及其多向分化潛能的生物學特性,使其廣泛應用于生物學研究的各個領域, 它的潛在醫(yī)學應用價值已成為世界范圍內(nèi)研究的熱點。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。目前，已報道的自ES細胞誘導分化的細胞主要包括胰島細胞、造血細胞、肝細胞、神經(jīng)細胞、脂肪細胞、心肌細胞、內(nèi)皮細胞、上皮細胞、成骨細胞、軟gu細胞和黑素細胞等。

流式細胞分選

流式細胞分選技術是利用流式細胞分選儀，以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細胞或微粒,測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強度,從而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測的--種現(xiàn)代細胞分析技術，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單ke隆分選，能復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離,單次可同時對其中一種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單分選或細胞芯片制備。分選后的細胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等，可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。7%的瓊脂糖和2xDMEM培養(yǎng)基在無菌試管中相混以后，再向管中加入0。硬件中樣本細胞丟棄的比例低于5%，保證樣本中目標細胞的高回收率。

大鼠gu髓間充質gan細胞的分離

操作方法

(1 )取SD大鼠( 2周齡)，頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺內(nèi)，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。

(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，無菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀分離出大鼠股骨和脛骨，剔除骨頭表面肌肉, PBS溶液沖洗兩遍。

(3 )從中間剪斷股骨和脛骨，用2ml無菌注she器吸取DMEM/F 12溶液沖出gu髓細胞多次，再用針頭吹打，吸管吸入離心管內(nèi)，1000r/min離心5min，棄上清，用PBS重懸細胞。

(4 )緩慢將細胞懸液加入預先裝有5mL淋巴細胞分離液的15mL離心管內(nèi)，保持細胞懸液在淋巴細胞分離液上層，注意不要攪動液面,保持二者分層界面。

(5 ) 2000rpm離心15-25min，離心后溶液分4層，吸取中間骨sui基質細胞層(白色渾濁狀)， PBS洗三次。

(6)用含15%胎牛xue清及青鏈mei素的DMEM/F 12以106/mL的細胞濃度接種于25cm2培養(yǎng)瓶中， 置37°C、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

( 7 ) 24小時后棄去培養(yǎng)液(看細胞貼壁情況)，PBS沖洗2-3次去除末貼壁細胞，加入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。以后每3d半量換液1次，-般10d細胞生長融合。

(8 )經(jīng)0.25%胰酶消化，1 : 2傳代，其后一般3-5d傳代1次,選取生長良好的第三代細胞進行后續(xù)實驗。