低溫生物菌種——制備

也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見(jiàn)圖），其中(1)～(4)為孢子制備過(guò)程。保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天(或較長(zhǎng)時(shí)間)。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子，對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基。將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無(wú)機(jī)鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶（5）液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

低溫生物菌種的保存方法

低溫保存法

①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；

②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存。

低溫生物菌種的應(yīng)用前景及發(fā)展趨勢(shì)

微生物在農(nóng)業(yè)上的作用已逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。國(guó)際上已有70多個(gè)國(guó)家生產(chǎn)、應(yīng)用和推廣微生物肥料。我國(guó)也有250家企業(yè)年產(chǎn)約數(shù)十萬(wàn)噸微生物肥料應(yīng)用于生產(chǎn)。這雖與同期化肥產(chǎn)量和用量不能相比，但確已開(kāi)始在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮作用，取得了一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效應(yīng)，隨著相關(guān)研究的深入和市場(chǎng)需求的不斷擴(kuò)大，微生物肥料生產(chǎn)已呈現(xiàn)出規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)模式。

生物菌種概述

生物菌種是有機(jī)固體廢物（包括有機(jī)垃圾、秸稈、畜禽糞便、餅粕、農(nóng)副產(chǎn)品和食品加工產(chǎn)生的固體廢物）經(jīng)生物肥菌種發(fā)酵、除臭和完全腐熟后加工而成的有機(jī)肥料。能夠調(diào)理土壤、激發(fā)土壤中微生物活躍率、克服土壤板結(jié)、增加土壤空氣通透性。提高土壤肥力，使糧食作物、經(jīng)濟(jì)作物、蔬菜類、瓜果類大幅度增產(chǎn)。

注意：

①視水分多少增減配比，發(fā)酵混合物的總水分應(yīng)控制在60～65%。過(guò)高過(guò)低均不利于發(fā)酵，水過(guò)少，發(fā)酵慢；水過(guò)多會(huì)導(dǎo)致通氣差、升溫慢并產(chǎn)生臭味。水分合適與否判斷辦法：手緊抓一把物料，指縫見(jiàn)水印但不滴水，落地即散。

②如果按每噸添加1公斤尿素或10公斤過(guò)磷酸鈣發(fā)酵效果。