低溫生物菌種——菌種分離方法介紹

孢子分離又可分為以下幾種方法：

( 1 ）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開(kāi)傘、未裂破的子實(shí)體，洗凈后用75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)熏蒸消毒12 ～ 24 小時(shí)，再按無(wú)菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，后置于25 ～ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 ）孢子印采集法：取滅過(guò)菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開(kāi)傘或未開(kāi)裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時(shí)后，便落下孢子，形成印痕（即孢子?。?。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤(pán)等組成。鐘罩下為一搪瓷盤(pán)，直徑25 厘米左右，盤(pán)內(nèi)先墊襯4～6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個(gè)孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無(wú)菌室或無(wú)菌箱內(nèi)。然后，用小刀割取1 塊4～5 厘米大小的子實(shí)體，插在收集器內(nèi)的三角架頂上（若無(wú)孢子收集器，也可用培養(yǎng)皿代替）。再置于溫度24 ～26 ℃下培養(yǎng)24 小時(shí)，培養(yǎng)皿中便可見(jiàn)到白色粉狀物，此即為孢子。此時(shí)，可將孢子收集器再移至接種箱內(nèi)，取出培養(yǎng)皿，蓋好，并在培養(yǎng)皿內(nèi)加入10 ～ 20 毫升的無(wú)菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無(wú)菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養(yǎng)基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃溫度下培養(yǎng)5 ～ 7 天，培養(yǎng)基上便可長(zhǎng)出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時(shí)，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當(dāng)白色菌絲長(zhǎng)滿試管時(shí)，便得純菌種。

什么是低溫生物菌種？

低溫生物菌種又稱生物肥料、接種劑或菌肥(bacterial manure)等，是指以微生物的生命活動(dòng)為核心，使農(nóng)作物獲得特定的肥料效應(yīng)的一類肥料制品。微生物肥料和微肥有本質(zhì)的區(qū)別：前者是活的生命，而后者是礦質(zhì)元素。微生物資源豐富，種類和功能繁多，可以開(kāi)發(fā)成不同功能、不同用途的肥料。而且微生物菌株可以經(jīng)過(guò)人工選育并不斷純化、復(fù)壯以提高其活力，特別是隨著生物技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，通過(guò)基因工程方法獲得所需的菌株已成為可能。巨大芽孢菌、膠質(zhì)芽孢菌、固氮芽孢菌、球形芽孢菌、側(cè)孢短芽孢菌等被廣泛用于生產(chǎn)生物肥料。

低溫生物菌種的存儲(chǔ)及施用規(guī)范

儲(chǔ)存和施用技術(shù)嚴(yán)格

溫度、光照、酸堿度和滲透壓等環(huán)境因素都能影響到微生物的存活。儲(chǔ)存微生物肥料應(yīng)選擇避光、低溫環(huán)境條件。施用微生物肥料應(yīng)防止長(zhǎng)時(shí)間暴露在陽(yáng)光下，以免紫外線殺滅肥料中的微生物；微生物肥料不應(yīng)直接與化肥混合施用，以免因滲透壓的改變而抑制或殺滅其中的有效菌等。

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