1.刺激的和非刺激的細(xì)胞裂解液

2.蛋白酶抑l制劑

3. 4°C管搖桿或搖床

4. 0.5 M EDTA，pH8.0

5. 1 M氯化鎂

6. 2倍還原SDS-PAGE樣品緩沖液

7.電泳和免l疫印跡系統(tǒng)

8.免l疫印跡洗滌緩沖液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％

吐溫20）

9.免l疫印跡封閉緩沖液（TBST包含5％脫脂奶粉或3％BSA）

10. PVDF或硝l酸纖維素膜

11.二抗

12. ECL檢測試劑

Arf樣蛋白1（Arl1）是GTpases的Ras超家族中的調(diào)控性GTPases Arf家族的成員，并且在整個(gè)真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1對果蠅和秀麗隱桿線蟲的早期胚胎發(fā)育至關(guān)重要。 Arl1在主要序列，細(xì)胞定位和功能（膜運(yùn)輸調(diào)節(jié)）上與Arf1-6較相似，甚至共享幾個(gè)共同的結(jié)合伴侶。 除了其在高爾基體/反式高爾基體網(wǎng)絡(luò)中的膜運(yùn)輸功能中，還有報(bào)道表明Arl1在酵母中的離子穩(wěn)態(tài)中可能發(fā)揮作用。

Arf6激l活測定。 經(jīng)GDP（lane1）或GTPγS（lane 2）處理后，純化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性Arf6單克l隆抗l體進(jìn)行免l疫沉淀。

分析原理

基于構(gòu)型特異性抗Gα13-GTP的NewEast生物科學(xué)Gα13活化檢測試劑盒從細(xì)胞提取物或體外檢測活性Gα13-GTP水平的單克l隆抗l體GTPγS負(fù)載Gα13活化試驗(yàn)。簡單地說，抗活性Gα13小鼠單克l隆抗l體用含有Gα13-GTP的細(xì)胞裂解液培養(yǎng)。結(jié)合的活性Gα13將被蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l體免l疫印跡法檢測沉淀的活性Gα13。

Gα13活化試驗(yàn)。MEF細(xì)胞分別用LPA（第2道）或不加LPA（1道）處理。細(xì)胞裂解物用抗活性Gα13單克l隆抗l體（Cat）孵育。#26902）（頂面板）。這個(gè)用抗Gα13兔多克l隆抗l體（Cat）免l疫印跡法檢測沉淀活性Gα13#21005年）。底部的面板顯示了用抗Gα13的細(xì)胞裂解物的Western blot（5%在頂部面板中使用的）。