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發(fā)布時間:2021-08-20 16:23  

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原位雜交;原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交!

使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。

以菌落原位雜交為例:對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進行克8隆篩選時,可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝5酸纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后,對菌落進行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。



就DNA探針和RNA探針的比較,DNA探針在雜交過程中會出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能,也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體,從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用,將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。

Tips:RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性,其檢測特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴增的方法,可以更方便地進行RNA探針的制備;RNA探針合成后,還需驗證其對目標片段檢測的靈敏度和特異性。





原位雜交組織(或細胞)化學技術(shù)簡稱原位雜交(In situ hybridization, ISH)是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標記物的核酸探針與組織細胞內(nèi)待測的核酸,按堿基互補配對原則進行特異性結(jié)合,形成雜交體,然后用與標記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng),通過組織化學或免3疫組織化學方法在核酸原有位置進行細胞內(nèi)定位、定性和定量研究。為分子水平研究細胞內(nèi)基因表達及有關(guān)細胞5因子的調(diào)控提供了有效的工具??梢暈榻M織化學與免3疫組織化學的重大突破。

原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保護組織和細胞的形態(tài),更能準確地反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。





顯色原位雜交 (CISH)

顯色原位雜交 (CISH) 能讓您利用組織學實驗室中已經(jīng)存在的方法在組織形態(tài)學背景下獲取遺傳信息。 我們提供用于CISH分析的CISH DNA探針和關(guān)鍵試劑。

熒光原位雜交 (FISH)

多重熒光原位雜交 (FISH) 能讓您利用單一樣本同時檢測多個靶標并直觀顯示共定位情況。 使用不同光譜的熒光基團標記每種不同的雜交探針,這種方法能讓您在單一樣本中解析多種遺傳成分或多基因表達模式,并提供多色直觀顯示。