廣州碩譜生物科技有限公司C8固相萃取柱批發(fā)

正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動(dòng)相極性的分離模式。

常見(jiàn)的極性固定相有：硅膠，氧化鋁，弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相模式下，溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強(qiáng)度也逐漸增大。另外，如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時(shí)，應(yīng)挑選選擇性好的吸附劑。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)物。

為何 SPE小柱操作強(qiáng)調(diào)流速？

SPE小柱填料充填壓實(shí)后，形成柱床，當(dāng)溶劑流過(guò)小柱時(shí)，速度過(guò)快會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)問(wèn)題：一是對(duì)粘結(jié)相填料而言，由于流速過(guò)快，使其不能充分浸潤(rùn)舒展，從而使其保持活性降低；二是流速過(guò)快會(huì)使小柱形成溝槽，使其未充分浸潤(rùn)，從而降低吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標(biāo)物質(zhì)的傳質(zhì)過(guò)程，從而降低回收率。當(dāng)柱流速度為0.5-3.0 mL/min時(shí)，通常不會(huì)產(chǎn)生溝槽效應(yīng)，且溝槽的形成與柱床高度有關(guān)；當(dāng)柱流速度為0-3.0 mL/min時(shí)，由于橫截面積較大，柱床較低，溝槽效應(yīng)較小，因而適用于高流速條件下的大體積水樣的富集；當(dāng)離子交換和特定吸附作用時(shí)，填料和分析靶物的作用時(shí)間較長(zhǎng)，控制流速可保證良好的保留效果。當(dāng)我們極端pH條件下需要使用反相填料時(shí)，建議使用聚合物基質(zhì)的反相填料，如HLB,PSD等，聚合物基質(zhì)的填料pH耐受范圍是1-14，適用范圍非常廣哦。

溶劑環(huán)境的pH怎么影響化合物在小柱上的保留，為什么我們要關(guān)注化合物的pKa值，在C18小柱中需要考慮這些因素嗎？

我們來(lái)說(shuō)一下，Ka指的是酸度系數(shù)，又名酸離解常數(shù)，可以理解為酸離解H離子的能力，而pKa=-lgKa，對(duì)于酸，在環(huán)境pH下存在如下平衡：左邊的A-/HA，實(shí)際是指溶劑環(huán)境下，離子態(tài)和分子態(tài)的比例，右邊反映了左側(cè)兩者的轉(zhuǎn)化關(guān)系，取決于（pH-pKa)的數(shù)值大小。SPE小柱和色譜柱之間的一個(gè)區(qū)別是，SPE是一次性消耗品，在耐受溶劑范圍之外，短時(shí)間的溶劑洗滌對(duì)小柱的保留特性幾乎沒(méi)有影響，而且不會(huì)造成保留的顯著差異，因此它使用的pH值范圍較寬，一般可在pH值范圍1-10之間使用，而不會(huì)造成結(jié)果的差異。對(duì)于離子交換小柱，保持目標(biāo)物的離子化而非分子態(tài)，是一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，這對(duì)于離子交換作用機(jī)理的交換柱，將直接關(guān)系到其實(shí)驗(yàn)成敗。而對(duì)于硅膠鍵合C18小柱的萃取，由于硅膠（—SiOH）不能完全“封端”，在pH大于4.0的情況下，硅膠都會(huì)帶上負(fù)電荷，因而會(huì)使得能電離的化合物與硅膠作用，增強(qiáng)了這種附帶的次級(jí)作用理（主作用力為非極性相互作用力），而使得此類物質(zhì)在硅膠-C18上的保留增強(qiáng)，若只考慮C18的非極性作用力，必然會(huì)導(dǎo)致回收結(jié)果的不盡人意。

固相萃?。⊿olid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱SPE）,也稱固相提取，是一項(xiàng)結(jié)合了選擇性保留、選擇性洗脫等過(guò)程的分離技術(shù)。在蛋白質(zhì)純化中，C18柱是優(yōu)1秀的除鹽工具，因?yàn)闃悠分械柠}在C18柱上沒(méi)有保留。 SPE也是一個(gè)柱色譜分離過(guò)程，分離機(jī)理、固定相和溶劑的選擇等方面與高1效液相色譜（HPLC）有許多相似之處。

反相萃取吸附機(jī)理。

反相作用機(jī)理：

對(duì)于通過(guò)非極性作用力吸附在非極性SPE柱上的目標(biāo)化合物，可以用具有非極性性質(zhì)的溶劑洗脫，如氯1仿、環(huán)1己烷、乙1酸乙酯等。只要溶劑的洗脫強(qiáng)度足以破壞目標(biāo)化合物與吸附劑非極性官能團(tuán)之間的范德華力，就可以順利地將目標(biāo)化合物從SPE柱上洗脫下來(lái)。目前，我國(guó)對(duì)常見(jiàn)食物中苯并芘的限量標(biāo)準(zhǔn)為：肉制品、糧食的食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)為5μg/kg以下，植物油為10μg/kg以下，熏烤動(dòng)物性食品為5μg/kg以下。即便是極性較強(qiáng)的甲1醇，對(duì)于許多化合物來(lái)說(shuō)也具有足夠的非極性作用力將其洗脫。有時(shí)單一溶劑不能把疏水性強(qiáng)的目標(biāo)化合物完全洗脫下來(lái)，則可考慮使用二氯1甲1烷：乙1酸乙酯（1：1，體積比）。

色譜柱維護(hù)-反相柱

樣品

zui好將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。4）洗脫--用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)洗脫下來(lái)并收集（注意流速不要過(guò)快，以1ml/min為宜）。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物，zui好使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過(guò)濾。樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑（例如，流動(dòng)相為水，樣品溶劑為甲1醇），為達(dá)到較好峰形，需要降低進(jìn)樣量（以250x4.6mm規(guī)格為例，小于10μL）。

固相萃取(Solid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱 SPE)是20世紀(jì)70年代中期發(fā)展起來(lái)的樣品前處理技術(shù)，其用途廣泛，并日益受到人們的歡迎。主要作品?動(dòng)物源性食品中β受體激動(dòng)劑的多組分殘留測(cè)定方法?安譜MCX小柱在β受體激動(dòng)劑的使用?固相萃?。合嗌V串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)辣椒粉中羅丹明B的檢測(cè)?固相萃取小柱在不同乳制品中檢測(cè)三聚1qíng胺的應(yīng)用?飼料酵母中三聚1qíng胺殘留量的檢測(cè)。按吸附劑填料和吸附機(jī)理的不同，主要分為正相、反相、離子交換和混合固相萃取小柱，采用正相、反相固相萃取小柱，主要用于萃取分離極性和非極性化合物，但對(duì)某些帶電物質(zhì)(離子化合物)的萃取回收率較低，如C18填料的固相萃取小柱，當(dāng)目標(biāo)化合物為離子態(tài)時(shí)，C18對(duì)該化合物的影響較小。針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，月旭推出了離子交換固相萃取硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)小柱。

固相萃取操作中常見(jiàn)的問(wèn)題

凈化效果不理想

凈化模式的改進(jìn)通常而言采用保留目標(biāo)化合物的模式比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好，如果正在分析的項(xiàng)目為某一種或某一類化合物分析，zui好是采用保留目標(biāo)化合物的凈化模式；舉一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，同樣是分析蔬菜中的多菌靈(一類堿性農(nóng)1藥)，使用陽(yáng)離子交換柱可以專一性地保留這些農(nóng)1藥，使它們基本與干擾物完全分離，而使用正相吸附劑或石墨化炭黑進(jìn)行保留干擾物的操作僅能把主要的干擾物除去，仍有較多干擾物存留。采用陽(yáng)離子交換機(jī)制，可將萃取過(guò)程中pH調(diào)至低于目標(biāo)物pKa的兩個(gè)pH單位，即pH=2。

另外，如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時(shí)，應(yīng)挑選選擇性好的吸附劑；選擇性方面，離子交換＞正相＞反相。