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發(fā)布時(shí)間:2021-06-08 09:21  
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蛋白表達(dá)系統(tǒng)
蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個(gè)體系可以實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。一般由以下幾個(gè)部分組成:
1、宿主。表達(dá)蛋白的生物體。可以為細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達(dá)蛋白的種類也不相同。
2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同,分為原核(細(xì)菌)表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體、昆蟲表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導(dǎo),外源基因可以在宿主中表達(dá)。
3、輔助成分。有的表達(dá)系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進(jìn)入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達(dá)體系中的桿狀病毒。
folin―酚試劑法早先是由lowry確定了蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的基本步驟。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。這個(gè)測(cè)定法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng),要準(zhǔn)確控制操作時(shí)間,標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式,且專一性較差,干擾物質(zhì)較多。對(duì)雙縮脲反應(yīng)發(fā)生干擾的離子,同樣容易干擾lowry反應(yīng)。而且對(duì)后者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素(0.5%),硫酸納(1%),NaNO濃度(1%),TCA(0.5%),乙醇(5%),C4H10O(5%),CH3COCH3(0.5%)等溶液對(duì)顯色無影響,但這些物質(zhì)濃度高時(shí),必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液,只須加濃碳酸鈉―NaOH溶液,即可顯色測(cè)定。若樣品酸度較高,顯色后會(huì)色淺,則必須提高碳酸鈉―NaOH溶液的濃度1~2倍。