親和柱的測定原理

親和柱，吸附力高柱容量大，適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結合使用，定量檢測DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理，提高了樣品的純度，純化后的提取液可用不同的分析方法測定。

測定的基礎是抗原反應，抗嘔吐毒素(DON)的連接在柱內凝膠介質上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON親和柱，在親和柱內，DON與結合，洗滌液通過親和柱除去未被結合的雜質。之后洗脫DON，然后進行相關分析。

親和柱——親和層析的用途

簡單來說，親和層析利用流動相和固定相內不同生物分子之間相互作用強度的差異來分離物質。

親和層析常見的用途是純化重組蛋白。親和層析是從粗混合物中純化蛋白質或核酸的較佳選擇。如果蛋白質的分子量，疏水性，電荷等未知，親和色譜法仍可適用于這種情況。一個典型例子是嘗試分離具有特定活性的酶時，可以用與所選底物相似或相同的連接配體構建親和柱。

親和柱——親和層析的應用

抗原和利用抗原、之間高特異的親和力而進行分離的方法又稱為親和層析。例如將抗原結合于親和層析基質上，就可以從中分離其對應的。在蛋白質工程菌發(fā)酵液中所需蛋白質的濃度通常較低，用離子交換、凝膠過濾等方法都難于進行分離，而親和層析則是一種非常有效的方法。將所需蛋白質作為抗原，經(jīng)動物后制備，將與適當基質偶聯(lián)形成親和吸附劑，就可以對發(fā)酵液中的所需蛋白質進行分離純化。抗原、間親和力一般比較強，其解離常數(shù)為108－10?12M，所以洗脫時是比較困難的，通常需要較強烈的洗脫條件?？梢圆扇∵m當?shù)姆椒ㄈ绺淖兛乖?、種類或使用類似物等來降低二者的親和力，以便于洗脫。

另外金黃色球菌蛋白A（ProteinA）能夠與球蛋白G（IgG）結合，可以用于分離各種IgG。