分光光度計與酶1標儀的主要區(qū)別

分光光度計和酶1標儀都是試驗室常用的兩種儀器，它們的測定原理是相同的，都是運用朗伯-比耳規(guī)矩，測定的都是樣本的吸光度。

　　酶1標儀依照功用的不同區(qū)分,能夠分為(1)光吸收酶1標儀(可見酶1標儀，紫外/可見酶1標儀)(2)熒光酶1標儀(3)化學發(fā)光酶1標儀。

　　分光光度計依照波長及運用范疇的不同能夠分為：(1)可見光分光光度計(2)紫外分光光度計(3)紅外分光光度計(4)熒光分光光度計(5)原子吸收分光光度計。

光的性質

光的波粒二相性

?      人們對電磁輻射兩重性的認識爭論了很久，有兩種說法：一是粒子說，把光看成微粒子，認為光與物質相互作用的現(xiàn)象（如吸收、發(fā)射、反射等）表明光是具有不連續(xù)能量的微粒，光具有粒子性；二是波動說，把光看成一種波，它可以反射、衍射、折射、散射、傳播等，它可用速度、頻率、波長等參數來描述，這表明光具有波的性質。到1900年，普朗克提出論，把電磁輻射的粒子說和和波動說聯(lián)系起來，并提出了光（光子）能量與電磁輻射的頻率有關，其數學表達式為

?      E=hv=hc/λ

?      E：輻射的光子能量J

?      h：普朗克常數

?      v：輻射的頻率

?      c：光速

?      λ：波長

分光光度計測蛋白質

蛋白質的直接定量（UV法）

　　這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質，一般要消除320nm 的“背景”信息，設定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，優(yōu)異的線性范圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時，發(fā)現(xiàn)讀數“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結果很不穩(wěn)定。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅橙，黃綠，藍靛，紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源?？梢姽舛扔嫃V泛應用于食品、藥品、電力、生物研究、教學科研、化學化工、質量監(jiān)督、水質環(huán)保和商檢等各大領域。分光光度計的保養(yǎng)和維護方法：在不使用時不要開光源燈。如燈泡發(fā)黑（鎢燈）、亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應及時更換新燈。更換后要調節(jié)好燈絲位置。不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污粘附，若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。