自噬流檢測

自噬是調(diào)節(jié)真核細鵬生長、和能量代謝的重要生物學機制。細胞自噬行使其生物學功能的前提是自噬流的話化。大量證據(jù)表明自噬流受損與多種慢性炎性疾病，特別是、神經(jīng)退行性疾病及組織纖維化的發(fā)病密切相關，目前對于自噬液的檢別是自噬與其相關疾病研究領域的熱點。由于自噬流是一個曲多個步驟組成的動態(tài)過程。然后去固定液，加適量GIMSA應用染色液染10~30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。因此往需要精細的突驗才能準確判斷自啦流狀態(tài)。

細胞分化

細胞分化是指同一來源的細胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結構、功能特征各不相同的細胞類群的過程，其結果是在空間上細胞產(chǎn)生差異，在時間上同一細胞與其從前的狀態(tài)有所不同。細胞分化的本質(zhì)是基因組在時間和空間上的選擇性表達，通過不同基因表達的開啟或關閉，終產(chǎn)生標志性蛋白質(zhì)。常用的解鏈方法為鹽酸加熱、蛋白酶處理等，使DNA雙鏈部分單鏈化，抗Brdu小鼠單與增殖細胞核內(nèi)的Brdu結合，再經(jīng)酶標抗小鼠IgG孵育、呈色，顯示進入S期細胞的情況。細胞誘導是指將一群不同類型或者形態(tài)結構、功能特征存在差異的細胞通過生物學、物理學等手段，將之轉變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結構、功能特征的細胞群體的過程。

目的

學習和掌握外源基因?qū)胝婧思毎闹饕椒ā|(zhì)體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。

實驗原理

上圖所示是脂質(zhì)體介導轉染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進入細胞的一般過程。

外源基因進入細胞主要有四種方法：法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導法和病毒介導法。法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；3、將質(zhì)粒DNA(約2-4ul)2ul加入dorf管中 DMEM至50u1。病毒法是利用包裝了外源基因的病毒細胞的方法使得其進入細胞。但是由于法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大；病毒法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響；所以現(xiàn)在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多采用脂質(zhì)體法。

利用脂質(zhì)體轉染法重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例，細胞密度以及轉染的時間長短和培養(yǎng)基中的含量都是影響轉染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉染條件對于效率的提高有巨大的作用。