分光光度計(jì)與酶1標(biāo)儀的主要區(qū)別

分光光度計(jì)和酶1標(biāo)儀都是試驗(yàn)室常用的兩種儀器，它們的測(cè)定原理是相同的，都是運(yùn)用朗伯-比耳規(guī)矩，測(cè)定的都是樣本的吸光度。

　　酶1標(biāo)儀依照功用的不同區(qū)分,能夠分為(1)光吸收酶1標(biāo)儀(可見(jiàn)酶1標(biāo)儀，紫外/可見(jiàn)酶1標(biāo)儀)(2)熒光酶1標(biāo)儀(3)化學(xué)發(fā)光酶1標(biāo)儀。

　　分光光度計(jì)依照波長(zhǎng)及運(yùn)用范疇的不同能夠分為：(1)可見(jiàn)光分光光度計(jì)(2)紫外分光光度計(jì)(3)紅外分光光度計(jì)(4)熒光分光光度計(jì)(5)原子吸收分光光度計(jì)。

光的性質(zhì)

光的波粒二相性

?      人們對(duì)電磁輻射兩重性的認(rèn)識(shí)爭(zhēng)論了很久，有兩種說(shuō)法：一是粒子說(shuō)，把光看成微粒子，認(rèn)為光與物質(zhì)相互作用的現(xiàn)象（如吸收、發(fā)射、反射等）表明光是具有不連續(xù)能量的微粒，光具有粒子性；二是波動(dòng)說(shuō)，把光看成一種波，它可以反射、衍射、折射、散射、傳播等，它可用速度、頻率、波長(zhǎng)等參數(shù)來(lái)描述，這表明光具有波的性質(zhì)。到1900年，普朗克提出論，把電磁輻射的粒子說(shuō)和和波動(dòng)說(shuō)聯(lián)系起來(lái)，并提出了光（光子）能量與電磁輻射的頻率有關(guān)，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為

?      E=hv=hc/λ

?      E：輻射的光子能量J

?      h：普朗克常數(shù)

?      v：輻射的頻率

?      c：光速

?      λ：波長(zhǎng)

分光光度計(jì)測(cè)蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)的直接定量（UV法）

　　這種方法是在280nm波長(zhǎng)，直接測(cè)試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測(cè)定過(guò)程非常簡(jiǎn)單，先測(cè)試空白液，然后直接測(cè)試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm 的“背景”信息，設(shè)定此功能“開(kāi)”。與測(cè)試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，優(yōu)異的線性范圍在1.0-1.5 之間。實(shí)驗(yàn)中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個(gè)正常的現(xiàn)象。事實(shí)上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過(guò)1%，表明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因?yàn)閃arburg 公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會(huì)被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測(cè)試較純凈、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對(duì)于比色法來(lái)說(shuō)，速度快，操作簡(jiǎn)單；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長(zhǎng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后，可得到由紅橙，黃綠，藍(lán)靛，紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計(jì)的光源?？梢?jiàn)光度計(jì)廣泛應(yīng)用于食品、藥品、電力、生物研究、教學(xué)科研、化學(xué)化工、質(zhì)量監(jiān)督、水質(zhì)環(huán)保和商檢等各大領(lǐng)域。分光光度計(jì)的保養(yǎng)和維護(hù)方法：在不使用時(shí)不要開(kāi)光源燈。如燈泡發(fā)黑（鎢燈）、亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置。不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污粘附，若不小心接觸過(guò)，要用無(wú)水乙醇擦拭。