低溫生物的篩選分離

篩選：工業(yè)發(fā)酵的有用，其篩選步驟包括分離、初篩和復篩，挑選具有某種能力的有用。

分離：首先是從土壤或腐生植物中收集含菌樣品，用無菌水稀釋后，涂布于置有適宜細菌、霉菌生長的瓊脂培養(yǎng)基平皿上，并將其倒置于恒溫箱中，培養(yǎng)一定時間，平皿上長出的許多單個菌落（單一微生物的集落）經分別分離后即為各種純種菌株，簡稱純種，移種至試管斜面培養(yǎng)基上，置4℃冰箱備用。

篩選模型：根據不同的篩選目的，采用不同的篩選模型。如常規(guī)篩選的方法是將土壤中分離所得的純種，在含有瓊脂培養(yǎng)基的平皿上培養(yǎng)后，用打孔器將菌塊移至含有試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一定時間后取出，如在菌塊的周圍有透明的抑菌圈，則表明此具有產生抑制試驗菌生長的物質的能力。所得經過搖瓶液體發(fā)酵，測定發(fā)酵液或菌絲體內的含量，選出生產能力高的。另一方面對所提取的進行結構分析、藥理試驗及臨床試驗等，確為有效者，即可作為生產。又如篩選脂肪酶生產的方法是將分離所得的霉菌涂布于含有牛脂的瓊脂培養(yǎng)基上，恒溫培養(yǎng)一定時間，如菌落周圍出現(xiàn)透明圈的，則該菌具有分解脂肪的能力，進一步作搖瓶發(fā)酵測定酶活力，挑選產量高者作生產的出發(fā)菌株。

                                                       低溫生物貯存的方式

1.冷凍真空干燥法。將已培養(yǎng)、生長豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的、卵白、脫脂奶制成菌懸液，將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5毫升，然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接，安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍，并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥，并在真空狀態(tài)下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本較高。

     2.液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的制成菌懸液備用；其次，準備安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%（體積比）甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌（1公斤/平方厘米，5分鐘）。無菌檢查后，接入要保藏的，火焰熔封瓶口，檢查是否漏氣，將封好口的安瓿瓶放在凍結器內，以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫，使保藏品逐步均勻地凍結，直至-35℃，以后凍結速度就不需控制，安瓿凍結后立即放入液氮罐內，在-150至-196℃保藏，該法只有少數科研院所使用。

低溫生物的寄主分離法

即從生長有某種真菌的寄主體上(如茯苓、木耳木段)取下木片，進行分離的方法。如木耳制種時，可選朵大、出耳多、質厚的耳棒(即長有木耳的木段)。采集后，削去耳根下的樹皮，將其橫斷面鋸成1 厘米厚的木片，在無菌條件下，切去無耳菌絲部分，留下有耳菌絲部分，浸入0 . 1 %水中1 分鐘，取出再用無菌水沖去木片上的液。然后，用解剖刀將木片切成0 . 5 厘米的小塊，放入斜面培養(yǎng)基內，置24 ~26 ℃下培養(yǎng)，及時淘汰雜菌，選取純菌絲進行移植培養(yǎng)，即得。

低溫生物篩選過程及應用價值

分離(separation)就是將一個混雜著各種微生物的樣品通過分離技術區(qū)分開，并按照實際要求和菌株的特性采取迅速、準確、有效的方法對他們進行分離、篩選，進而得到所需微生物的過程。菌株分離、篩選(screening)雖為兩個環(huán)節(jié)，但卻不能絕然分開，因為分離中的一些措施本身就具有篩選作用。工業(yè)微生物產生菌的篩選一般包括兩大部分:一是從自然界分離所需要的菌株，二是把分離到的菌株進一步純化并進行代謝產物鑒別。 ? {cF'RB. 在實驗工作中，為使篩選達到事半功倍的效果，總的說來可從以下幾個途徑進行收集和篩選: 4jis﹨W}%L3

(1)向保藏機構索取有關的菌株，從中篩選所需菌株。 ^ 5u}      

(2)由自然界采集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進行分離篩選。 O|%> <I? I

(3)從一些發(fā)酵制品中分離目的菌株，如從醬油中分離蛋白酶產生菌，從酒醪中分離淀粉酶或糖化酶的產生菌等。該類發(fā)酵制品經過長期的自然選擇，具有悠久的歷史，從這些傳統(tǒng)產品中容易篩選到理想的菌株。 r N$_(%m_N

菌株的分離和篩選一般可分為采樣、富集、分離、產物鑒別幾個步驟。 8*4X%a=O f

 含微生物樣品的采集  Q?7U  iTZ

自然界含菌樣品極其豐富，土壤、水、空氣、枯枝爛葉、植物病株、爛水果等都含有眾多微生物，種類數量十分可觀。但總體來講土壤樣品的含菌量很多。  G ^H Z4jg