等溫核酸試劑盒

RNA試劑盒使用方法

使用時一定要根據(jù)自己的實驗需要購買提取試劑盒， 如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析等后續(xù)實驗的結(jié)果。

當(dāng)前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內(nèi)無貨的時候，要從國外發(fā)貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（目前國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，還可以。

當(dāng)然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。

核酸試劑盒

樣本采集質(zhì)控重要性

樣本采集作為核酸檢測的首步，其中涉及的采樣耗材和病毒保存液的對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，不合格樣本會直接影響檢驗結(jié)果。在新冠核酸檢測中，不合格樣本通常是由于采樣問題和采樣用具問題導(dǎo)致的。

合格的病毒保存液目前主要要求兩點：

1.保證病毒的充分滅活，防止采樣、運輸和檢測過程的風(fēng)險。

2.保證病毒核酸（RNA）在采集、運輸過程中的穩(wěn)定性，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止樣本運輸保存過程中降解導(dǎo)致檢測的“假陰性”。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進(jìn)行得非?？?/span>，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。RPA擴增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴增結(jié)果可以通過凝膠電泳進(jìn)行終點檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來說，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實現(xiàn)數(shù)據(jù)的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應(yīng)終點的擴增子總量有所減少，適合獲得強熒光信號進(jìn)行動力學(xué)分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實現(xiàn)RNA模板的實時擴增。

提取技術(shù)是系統(tǒng)性核酸檢測方案的關(guān)鍵目前大量的核酸檢測試劑投入疫情，但是防控效率、檢測效率卻未有明顯提升。在央視記者采訪前線檢驗科工作人員的報道中，也指出目前核酸提取環(huán)節(jié)存在差異，影響了檢測能力的提升。

除前期的樣本采集、轉(zhuǎn)運、滅活等處理，核酸檢測產(chǎn)品在檢測過程中主要分為2個步驟，即核酸提取、擴增檢測。擴增檢測部分主要取決于前步驟核酸提取的純度，以及擴增儀器的性能，因此核酸檢測產(chǎn)品本身的差異性關(guān)鍵在于“核酸提取”這一步。