廣州碩譜生物科技有限公司C8固相萃取柱批發(fā)

正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動相極性的分離模式。

常見的極性固定相有：硅膠，氧化鋁，弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相模式下，溶劑體系的極性應按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強度也逐漸增大。另外，如果不止一種SPE柱可用于目標化合物的凈化時，應挑選選擇性好的吸附劑。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標物洗脫，選擇的淋洗液應在不洗脫目標物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應能恰好完全洗脫目標物。

為何 SPE小柱操作強調流速？

SPE小柱填料充填壓實后，形成柱床，當溶劑流過小柱時，速度過快會產(chǎn)生兩個問題：一是對粘結相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤舒展，從而使其保持活性降低；二是流速過快會使小柱形成溝槽，使其未充分浸潤，從而降低吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標物質的傳質過程，從而降低回收率。當柱流速度為0.5-3.0 mL/min時，通常不會產(chǎn)生溝槽效應，且溝槽的形成與柱床高度有關；當柱流速度為0-3.0 mL/min時，由于橫截面積較大，柱床較低，溝槽效應較小，因而適用于高流速條件下的大體積水樣的富集；當離子交換和特定吸附作用時，填料和分析靶物的作用時間較長，控制流速可保證良好的保留效果。當我們極端pH條件下需要使用反相填料時，建議使用聚合物基質的反相填料，如HLB,PSD等，聚合物基質的填料pH耐受范圍是1-14，適用范圍非常廣哦。

溶劑環(huán)境的pH怎么影響化合物在小柱上的保留，為什么我們要關注化合物的pKa值，在C18小柱中需要考慮這些因素嗎？

我們來說一下，Ka指的是酸度系數(shù)，又名酸離解常數(shù)，可以理解為酸離解H離子的能力，而pKa=-lgKa，對于酸，在環(huán)境pH下存在如下平衡：左邊的A-/HA，實際是指溶劑環(huán)境下，離子態(tài)和分子態(tài)的比例，右邊反映了左側兩者的轉化關系，取決于（pH-pKa)的數(shù)值大小。SPE小柱和色譜柱之間的一個區(qū)別是，SPE是一次性消耗品，在耐受溶劑范圍之外，短時間的溶劑洗滌對小柱的保留特性幾乎沒有影響，而且不會造成保留的顯著差異，因此它使用的pH值范圍較寬，一般可在pH值范圍1-10之間使用，而不會造成結果的差異。對于離子交換小柱，保持目標物的離子化而非分子態(tài)，是一個關鍵點，這對于離子交換作用機理的交換柱，將直接關系到其實驗成敗。而對于硅膠鍵合C18小柱的萃取，由于硅膠（—SiOH）不能完全“封端”，在pH大于4.0的情況下，硅膠都會帶上負電荷，因而會使得能電離的化合物與硅膠作用，增強了這種附帶的次級作用理（主作用力為非極性相互作用力），而使得此類物質在硅膠-C18上的保留增強，若只考慮C18的非極性作用力，必然會導致回收結果的不盡人意。

固相萃?。⊿olid Phase Extraction，簡稱SPE）,也稱固相提取，是一項結合了選擇性保留、選擇性洗脫等過程的分離技術。在蛋白質純化中，C18柱是優(yōu)1秀的除鹽工具，因為樣品中的鹽在C18柱上沒有保留。 SPE也是一個柱色譜分離過程，分離機理、固定相和溶劑的選擇等方面與高1效液相色譜（HPLC）有許多相似之處。

反相萃取吸附機理。

反相作用機理：

對于通過非極性作用力吸附在非極性SPE柱上的目標化合物，可以用具有非極性性質的溶劑洗脫，如氯1仿、環(huán)1己烷、乙1酸乙酯等。只要溶劑的洗脫強度足以破壞目標化合物與吸附劑非極性官能團之間的范德華力，就可以順利地將目標化合物從SPE柱上洗脫下來。目前，我國對常見食物中苯并芘的限量標準為：肉制品、糧食的食品衛(wèi)生標準為5μg/kg以下，植物油為10μg/kg以下，熏烤動物性食品為5μg/kg以下。即便是極性較強的甲1醇，對于許多化合物來說也具有足夠的非極性作用力將其洗脫。有時單一溶劑不能把疏水性強的目標化合物完全洗脫下來，則可考慮使用二氯1甲1烷：乙1酸乙酯（1：1，體積比）。

色譜柱維護-反相柱

樣品

zui好將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。4）洗脫--用小體積的溶劑將被測物質洗脫下來并收集（注意流速不要過快，以1ml/min為宜）。樣品溶液不應含有任何顆粒物，zui好使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用強溶劑（例如，流動相為水，樣品溶劑為甲1醇），為達到較好峰形，需要降低進樣量（以250x4.6mm規(guī)格為例，小于10μL）。

固相萃取(Solid Phase Extraction，簡稱 SPE)是20世紀70年代中期發(fā)展起來的樣品前處理技術，其用途廣泛，并日益受到人們的歡迎。主要作品?動物源性食品中β受體激動劑的多組分殘留測定方法?安譜MCX小柱在β受體激動劑的使用?固相萃取－液相色譜串聯(lián)質譜法對辣椒粉中羅丹明B的檢測?固相萃取小柱在不同乳制品中檢測三聚1qíng胺的應用?飼料酵母中三聚1qíng胺殘留量的檢測。按吸附劑填料和吸附機理的不同，主要分為正相、反相、離子交換和混合固相萃取小柱，采用正相、反相固相萃取小柱，主要用于萃取分離極性和非極性化合物，但對某些帶電物質(離子化合物)的萃取回收率較低，如C18填料的固相萃取小柱，當目標化合物為離子態(tài)時，C18對該化合物的影響較小。針對這個問題，月旭推出了離子交換固相萃取硅膠基質和聚合物基質小柱。

固相萃取操作中常見的問題

凈化效果不理想

凈化模式的改進通常而言采用保留目標化合物的模式比保留雜質的模式凈化效果好，如果正在分析的項目為某一種或某一類化合物分析，zui好是采用保留目標化合物的凈化模式；舉一個簡單的例子，同樣是分析蔬菜中的多菌靈(一類堿性農(nóng)1藥)，使用陽離子交換柱可以專一性地保留這些農(nóng)1藥，使它們基本與干擾物完全分離，而使用正相吸附劑或石墨化炭黑進行保留干擾物的操作僅能把主要的干擾物除去，仍有較多干擾物存留。采用陽離子交換機制，可將萃取過程中pH調至低于目標物pKa的兩個pH單位，即pH=2。

另外，如果不止一種SPE柱可用于目標化合物的凈化時，應挑選選擇性好的吸附劑；選擇性方面，離子交換＞正相＞反相。