反相色譜(RPC)是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機溶1劑的水溶液為流動相，根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣，RPC中溶質(zhì)也通過疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非極性基團所覆蓋，表現(xiàn)出強烈的疏水性。因此，必須用極性有機溶1劑或其水溶液進行溶質(zhì)的洗脫分離。溶質(zhì)在反相介質(zhì)上的分配系數(shù)取決于溶質(zhì)的疏水性，一般疏水性越大，分配系數(shù)越大。當(dāng)固定相一定時，可以通過調(diào)節(jié)流動相的組成調(diào)整溶質(zhì)的分配系數(shù)。RPC主要應(yīng)用于相對分子質(zhì)量低于5000，特別是1000以下的非極性小分子物質(zhì)的分析和純化，也可以用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分析和純化。4、吸液體，看液面從流動相瓶里上升，至離洗耳球5cm左右時停止該動作。由于反相介質(zhì)表面為強烈疏水性，并且流動相為低極性的有機溶1劑，生物活性大分子在RPC分離過程中容易變性失活，所以，以回收生物活性蛋白質(zhì)為目的時，應(yīng)注意選用適宜的反相介質(zhì)。

柱流失檢測在色譜柱老化過程結(jié)束后，利用程序升溫作一次空白試驗（不進樣）。一般是以10℃/min從50℃升至使用溫度，達到使用溫度后保持 10min。這樣我們就會的到一張流失圖。這些數(shù)值可能對今后作對比試驗和實驗問題的解決有幫助。在空白試驗的色譜圖中，不應(yīng)該有色譜峰出現(xiàn)。如果出現(xiàn)了色譜峰，通?？赡苁菑倪M樣口帶來的污染物。如果在正常的使用狀態(tài)下，色譜柱的性能開始下降，基線的信號值會。另外，如果在很低的溫度下，基線信號值明顯的大于初始值，那么有可能是色譜柱和　GC系統(tǒng)有污染。其他：色譜柱的保存用進樣墊將色譜柱的兩端封住，并放回原包裝。在安裝時要將色譜柱的兩端截去一部分，保證沒有進樣墊的碎屑?xì)埩粲谥?。在安裝時要將色譜柱的兩端截去一部分，保證沒有進樣墊的碎屑?xì)埩粲谥?。注意：?dāng)空氣中氫氣的含量在4-10%時，就有的危險。所以一定要保證實驗室有良好的通風(fēng)系統(tǒng)。

LC-100液相色譜系統(tǒng)分析前準(zhǔn)備：　　1、流動相前處理：將流動相經(jīng)過0.45um的微孔濾膜過濾后，倒入流動相瓶中，放入超聲波清洗器內(nèi)震蕩排氣20分鐘左右。　　2、流動相安裝：將處理好的流動相放在儲液托盤上，將對應(yīng)通道的洗液管路分別放入流動相瓶中，蓋好瓶蓋并記好對應(yīng)通道的流動相種類?！　?、樣品記錄：將樣品處理稀釋后使用注射1器過濾頭過濾后裝入1.5ml樣品瓶中（大約三分之二），放入自動進樣器的樣品架上，并記錄樣品瓶位置以便設(shè)置批處理文件?！　?、色譜柱安裝：打開柱溫箱門，將色譜柱的出口端安裝在色譜柱夾具上，在色譜柱上連接配管，在色譜柱出口端連接檢測器入口端的藍(lán)色PEEK管?！　?、檢查清洗液：在RINSE通道內(nèi)放置50%甲1醇：水溶液；含有兩根管路的通道內(nèi)放置10%異丙1醇：水溶液。如試樣在常用溶劑中不溶解，可將試樣與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入。