將色譜柱的出口端插入裝有己烷的樣品瓶中，正常情況下，我們可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡，就要重新檢查一氣裝置和流量控制器等是否正確設(shè)置，并檢查一下整個(gè)氣路有無泄漏。（2）成箱購買市售純凈水，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。等所有問題解決后，將色譜柱出口從瓶中取出，保證柱端口無溶劑殘留，再進(jìn)行下一步的安裝。 將色譜柱連接于檢測器上其安裝和所需注意的事項(xiàng)與色譜柱與進(jìn)樣口連接大致相同。如果在應(yīng)用中系統(tǒng)所使用的是ECD或NPD等，那么在老化色譜柱時(shí)，應(yīng)該將柱子與檢測器斷開，這樣檢測器可能會更快達(dá)到穩(wěn)定。確定載氣流量，再對色譜柱的安裝進(jìn)行檢查注意：如果不通入載氣就對色譜柱進(jìn)行加熱，會快速且性的損壞色譜柱。 色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對色譜柱進(jìn)行老化了。

色譜分析法、層析法，是一種分離和分析方法，現(xiàn)代生物企業(yè)生產(chǎn)過程中的核心技術(shù)之一。在分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。因此在定期清洗進(jìn)樣器，使用緩沖液后，要用水進(jìn)行充分的沖洗，以防沉積結(jié)晶鹽，磨損轉(zhuǎn)子。色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配，以流動相對固定相中的混合物進(jìn)行洗脫，混合物中不同的物質(zhì)會以不同的速度沿固定相移動，終達(dá)到分離的效果。色譜理論：保留時(shí)間保留時(shí)間是樣品從進(jìn)入色譜柱到流出色譜柱所需要的時(shí)間，不同的物質(zhì)在不同的色譜柱上以不同的流動相洗脫會有不同的保留時(shí)間，因此保留時(shí)間是色譜分析法比較重要的參數(shù)之一。保留時(shí)間由物質(zhì)在色譜中的分配系數(shù)決定：tR = t0(1 KVs / Vm)式中tR表示某物質(zhì)的保留時(shí)間，t0是色譜系統(tǒng)的死時(shí)間，即流動相進(jìn)入色譜柱到流出色譜柱的時(shí)間，這個(gè)時(shí)間由色譜柱的孔隙、流動相的流速等因素決定。K為分配系數(shù)，VsVm表示固定相和流動相的體積。這個(gè)公式又叫做色譜過程方程，是色譜學(xué)基本的公式之一。

液相色譜儀流動相性質(zhì)：     1、底劑決定基本的色譜分離，洗脫劑對某幾個(gè)組分選擇分離。這就是在配制流動相時(shí)造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。流動相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況。     2、親水性固定液常采用疏水性流動相，即流動相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜，極性柱稱正相柱，正相柱的底劑用低極性溶劑，洗脫劑用極性較強(qiáng)的溶劑。     3、若流動相的極性大于固定液的極性，稱為反相液液色譜。非極性柱稱為反相柱，反相柱常以水為流動相的主體，再加入不同配比的有機(jī)溶1劑做調(diào)節(jié)劑。

液相色譜儀與氣相色譜儀的區(qū)別：

　　1．分析對象的區(qū)別

　　GC：適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品；但對高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品，尤其對大多數(shù)生化樣品不可檢測占有機(jī)物的20%

　　HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品(包括有機(jī)介質(zhì)溶液)，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測用途廣泛，占有機(jī)物的80%

　　2．流動相差別的區(qū)別

　　GC：流動相為惰性，氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相有相互作用。

　　HPLC：流動相為液體，流動相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對分離起正向作用。且流動相種類較多，選擇余地廣，改變流動相極性和pH值也對分離起到調(diào)控作用，當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相也可以增大分離選擇性。且流動相種類較多，選擇余地廣，改變流動相極性和pH值也對分離起到調(diào)控作用，當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相也可以增大分離選擇性。