液相色譜工作原理

儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過(guò)檢測(cè)器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。

液相色譜儀分類

      液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動(dòng)相分離過(guò)程的物理化學(xué)原理，可分為以下五種。

　　1、吸附色譜：

　　用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。

　　2、分配色譜：

　　用載帶在固相基體上的固定液作固定相，以不同極性溶質(zhì)作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動(dòng)相相對(duì)極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當(dāng)固定相的極性大于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為正相分配色譜或簡(jiǎn)稱正相色譜;若固定相的極性小于流動(dòng)相的極性時(shí)，可稱為反相分配色譜或簡(jiǎn)稱反相色譜。

3、離子色譜：

　　用微粒離子交換劑作固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離。

　　4、體積排阻色譜：

　　用化學(xué)惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對(duì)樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。以水溶液作流動(dòng)相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過(guò)濾色譜;以有作流動(dòng)相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。

　　5、親和色譜：

　　以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動(dòng)相，依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實(shí)現(xiàn)對(duì)具有生物活性的生物分子的分離。

液相色譜的操作步驟

1).首先對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機(jī)系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。

2).對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3).正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進(jìn)入測(cè)試用流動(dòng)相(如流動(dòng)相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機(jī)相沖凈為止)。

4).一般情況下，流動(dòng)相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進(jìn)樣測(cè)試。

5).同時(shí)進(jìn)兩針標(biāo)樣，將其結(jié)果相比較，其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進(jìn)行樣品的測(cè)試了。

6).樣品測(cè)試結(jié)束后，就要進(jìn)行色譜儀及色譜柱的清洗和維護(hù)。如流動(dòng)相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機(jī)相進(jìn)行保護(hù)，否則，有損色譜柱。

7).關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

8).填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。