免l疫印跡和檢測（所有步驟均在室溫下攪拌）

1.在電印跡步驟之后，將PVDF膜浸入100％甲l醇中15秒鐘，然后使其在室溫下干燥5分鐘。注意：如果使用硝l酸纖維素代替PVDF，則應跳過此步驟。

2.在室溫下不斷攪拌下，在TBST中用5％脫脂奶粉或3％BSA封閉膜1小時。

將膜與抗Arf 6兔多克l隆抗l體在5％脫脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：50?1000（取決于樣品中Arf 6蛋白質的量）新鮮稀釋，孵育1-在室溫下持續(xù)攪拌2小時或過夜4oC。

3.用TBST將印跡的膜清洗3次，每次5分鐘。

4.將膜與二抗（例如山羊抗兔IgG，HRP偶聯物）一起孵育，在室溫下以恒定的比例在5％脫脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：1000的比例新鮮稀釋。攪動。

5.用TBST將印跡的膜清洗3次，每次5分鐘。

6.使用您選擇的檢測方法，例如ECL。

當前沒有直接測定法來測量Arl1 GTPases的激l活。

NewEast Biosciences Arl1激l活檢測試劑盒基于特定于配置的單克l隆抗l體，該抗l體特異性識別Arl1-GTP，但不能識別Arl1-GDP。 鑒于單克l隆抗l體對其抗原的高度親和力，可以在短時間內進行激l活測定。 該測定法可提供可靠的結果，并具有一致的可重復性。

Gα13活化試驗。MEF細胞分別用LPA（第2道）或不加LPA（1道）處理。細胞裂解物用抗活性Gα13單克l隆抗l體（Cat）孵育。#26902）（頂面板）。這個用抗Gα13兔多克l隆抗l體（Cat）免l疫印跡法檢測沉淀活性Gα13#21005年）。底部的面板顯示了用抗Gα13的細胞裂解物的Western blot（5%在頂部面板中使用的）。