PCR實驗室的設(shè)計原則

使用實時熒光PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；

采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。

PCR實驗室工作基本原則

1.進入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進行

試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

PCR實驗室注意事項——標(biāo)本制備區(qū)

為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

PCR實驗室布局

實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產(chǎn)物時，必須使用洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實驗室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠離PCR實驗室的地方棄掉。

PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流、物流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免實驗之間的相互干擾，防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

擴增區(qū)：主要進行DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，故應(yīng)當(dāng)注意實驗人員的安全防護。

PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。