等溫核酸試劑盒

RPA的原理;

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？欤话憧稍谑昼娭畠?nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

試劑盒

自PCR技術(shù)誕生以來已經(jīng)有三十年了。從經(jīng)典PCR、實時定量PCR再到現(xiàn)在的數(shù)字PCR，這一技術(shù)在不斷蛻

變卻從未淡出我們的視野。近年來，等溫擴增技術(shù)的興起無疑是對PCR的巨大挑戰(zhàn)。

等溫擴增技術(shù)的基因快速診斷方法,涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域,具體是用體外生物檢測試劑快速檢測病原微

生物的一種技術(shù)。

包括如下步驟:一、對被檢樣品進行預(yù)處理;二、包括目標(biāo)靶基因數(shù)據(jù)庫的建立;生物信息學(xué)的分析比較;

基因組多態(tài)性的分型處理和簡并堿基的運用,獲得各種靶基因的特異性引物兩對,分別與靶基因中的六個

獨立區(qū)域序列特異性匹配;三、進行等溫擴增反應(yīng);四、分析判斷結(jié)果。該方法的優(yōu)點:不需特殊試劑與

設(shè)備;高特異性;.靈敏度高;鑒定簡便;用途廣: 可用于食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域的質(zhì)量控制和環(huán)境、

水質(zhì)等監(jiān)測;用于醫(yī)學(xué)臨床診斷,用于代謝性疾病和遺傳疾病的基因診斷。

英國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)，目前新的等溫擴增檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個步驟，而PCR儀本質(zhì)上就是一個控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的適宜溫度在37°C - 42°C之間，無需變性，在常溫下即可進行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。據(jù)介紹，RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴增到可以檢出的水平，從單個模板分子得到大約1012擴增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實地檢測。RPA不僅可以對擴增產(chǎn)物進行終點檢測，還可以對擴增過程進行實時監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴增子長度在500bp以內(nèi)。不過，經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴增，也可以生成更長的擴增產(chǎn)物，或者減慢擴增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進行反應(yīng)。