武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國博士領(lǐng)銜創(chuàng)辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺。現(xiàn)憑借自身技術(shù)特色，依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢，面向全國提供的生物技術(shù)服務(wù)。依據(jù)對亞細(xì)胞分布的度不同，亞細(xì)胞定位的實驗設(shè)計也分成簡化型亞細(xì)胞定位分析和內(nèi)參型共定位分析。

注意: 1、不建議將爬片泡酸后高壓滅菌，首先玻片太薄高壓容易使玻片變形，其次濕滅很容易使玻片上留下水漬影響細(xì)胞貼壁；

   2、接細(xì)胞時控制合適的細(xì)胞量，避免收樣時細(xì)胞量過度擁擠甚至打堆影響結(jié)果的觀察。

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GFP，實際是給你要研究的物質(zhì)加上標(biāo)記，在此相當(dāng)于報告蛋白1653的作用。使用GFP必須構(gòu)建融合蛋白載體，并在轉(zhuǎn)染之后有效表達(dá)。亞細(xì)胞定位要研究蛋白質(zhì)的細(xì)胞定位，是在外面完成的一種實驗，不能再體內(nèi)蛋白質(zhì)細(xì)胞中完成，所以，研究的成本比較高，對專業(yè)知識的要求比較高。這樣，若在熒光顯微鏡下看到細(xì)胞內(nèi)某一部位存回在GFP信號，說明和GFP融合的蛋白也存在于該部位，這樣就達(dá)到了確定某答物質(zhì)亞細(xì)胞定位的目的。

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1）將融合基因（待測植物蛋白質(zhì)基因-報告基因）克隆到植物表達(dá)載體，得到重組表達(dá)載體；2）將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)，得到重組農(nóng)；3）向重組農(nóng)中加入農(nóng)侵染緩沖液，調(diào)節(jié)OD600為0.1～0.3，20-25℃靜置1-2h，得到侵染菌液；1）將融合基因（待測植物蛋白質(zhì)基因-報告基因）克隆到植物表達(dá)載體，得到重組表達(dá)載體。4）用針頭在植物葉片上避開葉脈扎孔，用無針頭將侵染菌液從扎孔處注射至植物葉片內(nèi)；5）培養(yǎng)植物2天，從注射部位取1-2cm2葉片；根據(jù)報告基因檢測待測植物蛋白質(zhì)在植物中的亞細(xì)胞定位。實驗證明，本方法具操作簡單、快速、標(biāo)記效果好、重復(fù)性好的優(yōu)點；還可用于基因表達(dá)調(diào)控及內(nèi)含子功能研究等，對研究新基因功能和表達(dá)調(diào)控奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

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確定亞細(xì)胞定位有多種方法，其中較常見的是目的蛋白與Marker的熒光雙染，然后用熒光顯微鏡來觀察。蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位實驗本質(zhì)上是熒光雙染技術(shù)，也可以結(jié)合生物信息學(xué)方法預(yù)測蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。