凍存袋的基本原理

利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或DMSO，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。

為什么需要凍存袋？

細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活物開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是沒有限制的。

凍存袋注意事項

1.欲冷凍保存之細胞應(yīng)在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80~90%致密度。

冷凍前檢測細胞是否仍保有其特有性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有antibody之產(chǎn)生。

2.細胞在液氮中可長期凍存沒有時間限制，而不會影響細胞活力﹔在-70度可保存數(shù)月。注意冷凍保護劑之品質(zhì)。

DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色是直接購買無菌產(chǎn)品，以5~10m1小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。

3.凍存細胞數(shù)量要足夠。無論再怎么小心，細胞在冷凍和復(fù)蘇過程中總會死掉一批的。所以，一開始凍存細胞的數(shù)量要足夠。一般要達到5× 10^6 /毫升，一瓶不夠兩瓶湊。但是，這個不能一概而論。有些細胞，比如雜交瘤細胞，只需要1-3x 10^6 /毫升