Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

將目標(biāo)包被于微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)，將未結(jié)合的生物素洗凈后，加入HRP標(biāo)記和親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（O.D.值），計(jì)算樣品濃度。

Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1  錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品  加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

2  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤  按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

3  標(biāo)準(zhǔn)品污染  使用一次性的滅菌吸頭， 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃

4  錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟  按照說(shuō)明書(shū)倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

5  波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長(zhǎng)為450nm，后者為492nm。雙波長(zhǎng)比色分析優(yōu)于單波長(zhǎng)。

6  標(biāo)準(zhǔn)品混用  不同批號(hào)試劑勿混用

7  試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高，標(biāo)準(zhǔn)品失活  盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

8  ELISA未終止而直接檢測(cè)450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測(cè)，否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）

ELISA試劑盒-ELISA檢測(cè)原理介紹

酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或結(jié)合到聚乙烯等固相載體上，利用抗原結(jié)合專一性進(jìn)行反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用比較多的一種酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥品和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測(cè)組織提取液和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。