等溫核酸試劑盒

試劑盒是用于盛放檢測化學(xué)成分、病毒種類等化學(xué)試劑的盒子。一般醫(yī)院、制藥企業(yè)使用。

完整的試劑盒包含以下各組分：

(1)已包被抗原的固相載體；

(2)酶標(biāo)記的抗原（結(jié)合物）；

(3)酶的底物；

(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品(定量測定中)；

(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

(7)酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的體積而異，在板式ELISA中一般采用3mol/L。

據(jù)介紹，RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴增到可以檢出的水平，從單個模板分子得到大約1012擴增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實地檢測。RPA不僅可以對擴增產(chǎn)物進行終點檢測，還可以對擴增過程進行實時監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴增子長度在500bp以內(nèi)。不過，經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴增，也可以生成更長的擴增產(chǎn)物，或者減慢擴增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進行反應(yīng)。

RNA試劑盒使用方法

使用時一定要根據(jù)自己的實驗需要購買提取試劑盒， 如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析等后續(xù)實驗的結(jié)果。

當(dāng)前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當(dāng)然還有其它的進口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內(nèi)無貨的時候，要從國外發(fā)貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（目前國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，還可以。

當(dāng)然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。

FAQ

1 RPA能實現(xiàn)多重化嗎?

可以。RPA技術(shù)支持在同一個管中同時進行多個擴增反應(yīng)。不過，多重化的引物組合需要精心設(shè)計，以便每個引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)不要超標(biāo)太多。如果在一個反應(yīng)中使用兩個以上的擴增引物，就應(yīng)該控制不同引物的量。另外，我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測多個擴增事件的探針、設(shè)備以及熒光團的兼容性。