實驗步驟

1、實驗之前，一定要確保高架十字迷宮整個裝置的清潔。這個步驟不僅僅是要求當(dāng)天的實驗，更加側(cè)重于每一次動物實驗完成后的清潔除味工作，一定要去除上一只動物在宮體內(nèi)遺留下來的尿液、糞便等，盡可能創(chuàng)造一個清潔、無味道的理想試驗環(huán)境。同時，實驗員需要記錄動物的編號、日期、狀態(tài)等信息；實驗動物提前運送到行為學(xué)實驗室臨時籠架 ,

適應(yīng)環(huán)境至少3H左右, 減少動物緊張。

2、將實驗動物（大鼠或者小鼠）從飼養(yǎng)籠中取出，實驗動物盡量背向?qū)嶒瀱T，將動物輕輕放在儀器宮體的中央?yún)^(qū)域，動物面向開臂，然后實驗員迅速安靜的離開；

3、打開SuperMaze或者VisuTrack動物行為分析軟件，跟蹤動物在高架十字迷宮儀器內(nèi)的軌跡運動，自動計算指標，通常實驗時長為5min；

4、實驗結(jié)束后，取出實驗動物，放入飼養(yǎng)籠，做好實驗完成動物的標記信息，同時，用酒精和紙巾清潔迷宮。

注意事項

1. 針頭大小與動物的種類有關(guān)，t 同時針頭一定要磨鈍。

2. 檢查灌注泵的運作情況，一定排出管子的氣泡和空氣，防止空氣栓塞。

3. 經(jīng)腹腔暴腔，先清楚升主動脈外面的脂肪組織和心外膜組織。

4. 將針頭經(jīng)左心室插入升主動脈（顏色變白的哦），并用鉗子固定。

5. 解開右心耳，同時開啟灌注泵。注意，不要隨便揭開心臟的其他部位，否則有時候可能會灌注成功但是絕大部分會造成灌注不成功，尤其。

6. 將 4 度的生理鹽水（好已動物的發(fā)白為標準，我們實驗室的大鼠約用 250ml）和多聚甲醛 (根據(jù)所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整個過程均應(yīng)將動物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。

2.2旋轉(zhuǎn)圓筒睡眠剝奪法

此方法于 1979 年先應(yīng)用于睡眠剝奪實驗中，設(shè)備主要由一柱形圓筒及一小型慢速馬達構(gòu)成。圓筒直徑 30 cm，高 30 cm 。圓筒底由 PVC (聚)構(gòu)成，側(cè)壁由直徑為 10.4 m m 的 PVC 桿圍成。桿長度 30 cm，桿之間間隔 15.5 m m，圓筒與小型馬達相連。馬達轉(zhuǎn)速為每 45 s轉(zhuǎn) 1 圈(也有學(xué)者應(yīng)用每 m in 轉(zhuǎn) 1 圈)。至少在實驗前 2 d每天將大鼠放入圓筒中適應(yīng)環(huán)境 1 次，適應(yīng)時間不少于 3 h。實驗時將馬達按 45 s每1 圈進行勻速轉(zhuǎn)動，通過圓筒的轉(zhuǎn)動帶動大鼠不停運動而達到睡眠剝奪的目的。此類方法簡單易行，睡眠剝奪效果明顯。缺點是長時間不停運動可引起機體的運動后應(yīng)激反應(yīng)及身體疲勞，可能干擾睡眠剝奪實驗結(jié)果! 此類方法發(fā)展出多種變化，有實驗者在進行新生大鼠睡眠剝奪時將筒旋轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)至 2~3 r/m in后期逐漸增加至 6~7 r/m in。